Создание мышиной модели гипоксически-ишемического повреждения головного мозга у новорожденных

Аннотация

Источник: Kim, M., et al. Нейроповеденческие оценки в мышиной модели гипоксически-ишемической травмы головного мозга у мышей. J. Vis. Exp. (2017).

Видео демонстрирует процедуру создания модели мыши для изучения гипоксически-ишемического повреждения головного мозга у новорожденных. В нем изложены шаги по хирургическому индуцированию ишемии и введению животного в гипоксию для усугубления повреждения мозга. Наконец, в нем показано, как оценить полученные повреждения головного мозга, чтобы убедиться, что мышиная модель подготовлена к дальнейшим научным исследованиям.

Протокол

Все процедуры с участием животных были рассмотрены местным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Мышиная модель неонатального повреждения головного мозга с ГИ-синдромом

1. Обезболите щенков изофлураном.
   1. Поместите детенышей (менее 5 человек) в коробку для анестезии и закройте крышку.
   2. Включите систему обезболивания примерно на 15 минут, отрегулируйте газ и изофлуран с помощью настольного наркозного аппарата. Отрегулируйте расходомер кислорода на 1,5 л/мин. Отрегулируйте исофурановый вапорайзер на 3-5% для индукции анестезии.
   3. Через 15 мин отрегулируйте исофурановый вапорайзер на 1-2% для поддержания анестезии.
2. Положите полностью обезболенного щенка под диссекционный микроскоп (животом к исследователю) и закрепите его скотчем.
3. Сделайте разрез ~0,7 мм на шее с помощью стерилизованных ножниц.
4. Аккуратно удалите жировую ткань с помощью стерилизованных щипцов и обнажите одностороннюю правую сонную артерию.
5. Перевязать одностороннюю правую сонную артерию рассасывающимся швом 5-0.
6. Зашить разрез на шее швом 5-0
.
7. Поместите каждого щенка в теплую гипоксическую камеру с температурой 37 °C на 1 час для восстановления. Не закрывайте крышку камеры.
8. Через 1 ч после операции, когда детеныши полностью проснулись, закройте крышку камеры гипоксии и уменьшите уровень газа для создания гипоксических условий (8%_О2 и 92%_Н2).
9. После 90 минут гипоксии верните щенков в клетки.
10. Через неделю после черепно-кишечной травмы повторите шаг 1.
    1. После проведения анестезии сделайте разрез на волосистой части головы стерилизованными ножницами и щипцами для выявления поражения головного мозга в заднебоковой области правого полушария.
       заметка: Это лечение вызывает гипоксию у щенков. Наличие и степень повреждения головного мозга у всех мышей визуально оцениваются невооруженным глазом через полупрозрачный череп. В зависимости от размера или объема обесцвечивания (т.е. поражения головного мозга) детеныши классифицируются на группы. Если видимого повреждения коры головного мозга нет, мышь классифицируется в группу «без повреждения коры головного мозга». При наличии видимого повреждения коры головного мозга (т.е. поражения в правом полушарии) мышь классифицируется в группу «корковое повреждение». Поскольку классификация мышей по группам производится через неделю после операции, группировки могут быть изменены, когда морфология образцов мозга четко определена во время жертвоприношения.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Гипоксическая камера	Чон До Био и Плант Ко	Экспериментальный строитель
Система обезболивания Harvard Apparatus Fluovac	Гарвардский аппарат
Коробка для анестезии			Акриловая коробка
Жидкая жидкость (изофлюоран)	Хана Фарм Ко., Лтд.		Общие анестетики (изофлуран 100 мл)
Мыши CD-1	Ориент Ко., Лтд.
Синий нейлон моно нерассасывающийся шов 5-0 50см	Эйли Ко., Лтд.	НБ 521