Создание модели мыши с инфекцией центральной нервной системы

Аннотация

Источник: Shen, T., et al. Мышиная модель острого вирусного энцефалита, вызванного вирусом денге. J. Vis. Exp. (2019)

Это видео демонстрирует создание модели мыши с инфекцией ЦНС. Грудному щенку вводят вирус как внутричерепно, так и внутрибрюшинно. Вирус распространяется, заражая ЦНС, вызывая гибель нейрональных клеток и воспаление. По мере прогрессирования заболевания у щенка оцениваются на наличие симптомов инфекции.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Процедура заражения

1. Приготовьте неадаптированные запасы DENV2 (штамм PL046)9 (первоначально полученные из Центров по контролю и профилактике заболеваний на Тайване, в диапазоне от 2,5 x 10⁷ до 1 x 10⁹ PFU/мл).
2. Разбавьте вирусный запас до 1 x 10⁶ PFU в среде Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 до общего объема 40 μл.
3. Наполните один шприц объемом 0,3 мл с иглой 30 G 10 мкл (2,5 x 10⁵ PFU) разбавленного вируса и наполните еще один шприц объемом 0,3 мл с иглой 30 G 30 мкл (7,5 x 10⁵ PFU) разведенного вируса.
4. Возьмите в руки 7-дневную мышь-сосунку ICR (Институт исследований рака) и выполните следующие действия.
   1. Для внутримозговой инъекции удерживайте мышь в положении лежа, надавливая на ушную раковину между указательным и большим пальцами, и внутрицеребрально введите 10 мкл разбавленного вируса в область лямбда, точку на пересечении сагиттального и лямбдоидного швов.
   2. После внутримозговой инъекции удерживайте мышь в лежачем положении указательным и большим пальцами и осторожно введите 30 μL разведенного вируса внутрибрюшинно в брюшную полость мыши.
      заметка: Чтобы избежать каннибализма, 75% алкоголя используется для создания временной потери обонятельного ощущения матери. Кроме того, рекомендуется накрывать подстилку стулом и мочой матери.
5. Уложите мышей-сосунков обратно в клетки и подождите 5 минут, чтобы проверить их безопасность после стимуляции жадностью мышей, включая ходьбу и сосание материнского молока.
   заметка: Чаще всего мыши демонстрируют нормальную активность после стимуляции, и, по-видимому, никаких вредных эффектов после технического задания не наблюдается.
6. Оцените ежедневный прогресс мышей с точки зрения массы тела (с помощью микрограммового баланса), острого вирусного энцефалита, подобного заболеванию (по оценке заболевания, как описано в разделе 2) и выживаемости.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Мемориальный институт Розуэлл Парк 1640 средний (RPMI)	Gibco	11875-085 (Английский)	Разбавление вируса
Инсулиновый шприц 0,3 мл	BD Ultra-FineII	328838	Внутримозговая и внутрибрюшинная инъекция
Микровесы	Лаборатория LabX МЕТТЛЕР ТОЛЕДО	АЛ104	Вес мыши
Неадаптированный DENV2 (штамм PL046)	Центры по контролю и профилактике заболеваний Тайваня	- T	Заразить мышь
Мышь-сосунка Института исследований рака (ICR)	БиоЛАСКО Тайвань Ко., Лтд	- T	Наша модель мыши