Method Article

Индукция экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита на мышиной модели

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Schmitz, K., et al. Биолюминесценция и ближняя инфракрасная визуализация неврита зрительного нерва и воспаления мозга в модели рассеянного склероза у мышей с помощью EAE. J. Vis. Exp (2017).

В этом видео мышиная модель рассеянного склероза установлена с использованием экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита (EAE). Мышке вводят эмульсию, содержащую нейрональный пептид и адъювант, что вызывает иммунный ответ, который активирует аутореактивные Т-клетки. Затем следует инъекция коклюшного токсина (ПТХ) для увеличения проницаемости гематоэнцефалического барьера, что позволяет автореактивным Т-клеткам проникать в мозг. Эта инфильтрация инициирует сигнальный каскад, который в конечном итоге приводит к повреждению миелина, имитируя демиелинизирующее состояние рассеянного склероза.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Индукция EAE у мышей SJL/J

  1. Мышей
    1. Используйте 11-недельных самок мышей SJL/J и дайте им привыкнуть в экспериментальной комнате в течение примерно 7 дней. Используйте n = 10 мышей в группе.
    2. Для оценки эффектов препарата необходимо непрерывно вводить препарат и плацебо контрольной группе в виде питьевой воды или пищевых гранул, начиная с 3-5 дней после иммунизации (n = 10 на группу). Во время пика заболевания принимайте лекарства или плацебо с молоком или кукурузными хлопьями, пропитанными водой с 3% сахаром.
  2. Материал для иммунизации
    1. Используйте набор для индукции EAE, состоящий из антигена (пептид белка протеолипид, PLP139-151, эмульсия 1 мг/мл) в эмульсии с полным адъювантом Фрейнда (CFA, убитая при нагревании Mycobacterium tuberculosis H37 Ra) и 2 флаконами (по 5 мкг каждый) лиофилизированного коклюшного токсина (PTX).
    2. Растворите PTX (2 мкг/мл) в 1x фосфатно-солевом буфере (PBS, т.е. добавьте 1,5 мл PBS в каждую пробирку PTX, хорошо перемешайте, удалите тем же наконечником для пипетки и добавьте к 1 мл PBS в 50 мл пробирки); хорошо перемешайте.
  3. иммунизация
    1. Вводите PLP/CFA подкожно 2 порциями, каждая по 100 μл, обе у основания хвоста.
    2. Вводите 100 мкл PTX внутрибрюшинно (в/в) два раза на мышь, первый раз через 1 - 2 ч после иммунизации, а второй - через 24 ч.
    3. Для контрольных мышей вводите CFA без PLP (2 порции по 100 мкл) плюс PTX без PLP.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Конфликт интересов не декларируется.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Эмульсия PLP139-151/CFAHooke Labs, Сент-Лоренс, МассачусетсЭК-0123Индукционный комплект EAE
Коклюшный токсинHooke Labs, Сент-Лоренс, МассачусетсЭК-0123Индукционный комплект EAE
IVIS Lumina SpectrumPerkin Elmer, Inc., Уолтем, СШАБиолюминесцентная и инфракрасная система визуализации
Программное обеспечение LivingImage 4.5Perkin Elmer, Inc., Уолтем, СШАCLS136334Программное обеспечение для анализа IVIS
ИзофлуранAbbott Labs, Иллинойс, США26675-46-7анестезирующее

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Experimental Autoimmune EncephalomyelitisMouse ModelNeuronal PeptideHeat Killed AdjuvantAntigen Presenting CellsBlood Brain BarrierPertussis ToxinMyelin DamageAutoreactive T CellsCentral Nervous System

Related Articles