Индукция экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита на мышиной модели

Аннотация

Источник: Schmitz, K., et al. Биолюминесценция и ближняя инфракрасная визуализация неврита зрительного нерва и воспаления мозга в модели рассеянного склероза у мышей с помощью EAE. J. Vis. Exp (2017).

В этом видео мышиная модель рассеянного склероза установлена с использованием экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита (EAE). Мышке вводят эмульсию, содержащую нейрональный пептид и адъювант, что вызывает иммунный ответ, который активирует аутореактивные Т-клетки. Затем следует инъекция коклюшного токсина (ПТХ) для увеличения проницаемости гематоэнцефалического барьера, что позволяет автореактивным Т-клеткам проникать в мозг. Эта инфильтрация инициирует сигнальный каскад, который в конечном итоге приводит к повреждению миелина, имитируя демиелинизирующее состояние рассеянного склероза.

Протокол

1. Индукция EAE у мышей SJL/J

1. Мышей
   1. Используйте 11-недельных самок мышей SJL/J и дайте им привыкнуть в экспериментальной комнате в течение примерно 7 дней. Используйте n = 10 мышей в группе.
   2. Для оценки эффектов препарата необходимо непрерывно вводить препарат и плацебо контрольной группе в виде питьевой воды или пищевых гранул, начиная с 3-5 дней после иммунизации (n = 10 на группу). Во время пика заболевания принимайте лекарства или плацебо с молоком или кукурузными хлопьями, пропитанными водой с 3% сахаром.
2. Материал для иммунизации
   1. Используйте набор для индукции EAE, состоящий из антигена (пептид белка протеолипид, PLP139-151, эмульсия 1 мг/мл) в эмульсии с полным адъювантом Фрейнда (CFA, убитая при нагревании Mycobacterium tuberculosis H37 Ra) и 2 флаконами (по 5 мкг каждый) лиофилизированного коклюшного токсина (PTX).
   2. Растворите PTX (2 мкг/мл) в 1x фосфатно-солевом буфере (PBS, т.е. добавьте 1,5 мл PBS в каждую пробирку PTX, хорошо перемешайте, удалите тем же наконечником для пипетки и добавьте к 1 мл PBS в 50 мл пробирки); хорошо перемешайте.
3. иммунизация
   1. Вводите PLP/CFA подкожно 2 порциями, каждая по 100 μл, обе у основания хвоста.
   2. Вводите 100 мкл PTX внутрибрюшинно (в/в) два раза на мышь, первый раз через 1 - 2 ч после иммунизации, а второй - через 24 ч.
   3. Для контрольных мышей вводите CFA без PLP (2 порции по 100 мкл) плюс PTX без PLP.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Эмульсия PLP139-151/CFA	Hooke Labs, Сент-Лоренс, Массачусетс	ЭК-0123	Индукционный комплект EAE
Коклюшный токсин	Hooke Labs, Сент-Лоренс, Массачусетс	ЭК-0123	Индукционный комплект EAE
IVIS Lumina Spectrum	Perkin Elmer, Inc., Уолтем, США		Биолюминесцентная и инфракрасная система визуализации
Программное обеспечение LivingImage 4.5	Perkin Elmer, Inc., Уолтем, США	CLS136334	Программное обеспечение для анализа IVIS
Изофлуран	Abbott Labs, Иллинойс, США	26675-46-7	анестезирующее