Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Инъекция вирусного вектора в черную субстанцию крысы для моделирования нейродегенеративных заболеваний

1.1K просмотров

⸱

8 июля 2025 г.

В этой статье

Аннотация

Источник: Van der Perren, A. et al., Разработка модели болезни Паркинсона на основе альфа-синуклеина у крыс с помощью стереотаксической инъекции рекомбинантного аденоассоциированного вирусного вектора.J. Vis. Exp.(2016).

Это видео демонстрирует процесс введения вирусного вектора в крысу substantia nigra для моделирования болезни Паркинсона. В нем описаны этапы подготовки крысы, микроинъекции вирусного вектора в черную субстанцию и процедура восстановления.

Протокол

Все процедуры с участием животных были рассмотрены местным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Производство и очистка рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV)

Примечание: производство и очистка векторов rAAV были выполнены с помощью Leuven Viral Vector Core (LVVC).

  1. Вкратце, трансфектируйте субконфлюентные клетки с низким (<50) проходом адгезивные клетки HEK 293T с использованием линейного раствора для трансфекции NaCl из полиэтиленимина 25 кД и трех различных плазмид в соотношении 1:1:1 в среде DMEM 2% фетальной бычьей сыворотки....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

figure-results-1
Рисунок 1: Стереотаксическая инъекция вектора rAAV2/7, кодирующего α-SYN, в SN крысы. (А, В, Е) Черепные швы на черепе крысы, определяющие две опорные точки: Брегма и Лямбда. (C) Стереотаксический атлас мозга крысы, представляющий область инъекции, а именно SN. (D) Крыса Вистар, расположенная в стереотаксической голо.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Самки 8-недельных крыс ВистарЖанвье200-250 г
Кетамин (Ниматек)Здоровье животных Eurovet804132
Медетомидин (Dormitor)Орион-Фарма/ Янссен Здоровье животных1070-499
Местный анестетик для кожи головы и ушей: Ксилокаин 2% гельАстразенека0137-547 (Английский)
ТеррамицинКомпания Pfizer0132-472 (Английский)
Бупренорфин (Ветергезик)Экуфар2623-627
Йодий 1% изопропанолаВВР0484-0100 (Английский
Стереотаксический каркас головыШтелинг
Шприц Гамильтона (30 калибр -20 мм -pst 2)Hamilton/ Сервис фильтров7803-07
атипамезол (Антиседан)Орион-Фарма/Эланко1300-185
Вектор rAAV A53T α-SYNLVVC, KU Leuvenhttps://gbiomed.kuleuven.be/english/research/50000715/laboratory-of-molecular-virology-and-gene-therapy/lvvc/
DMEM, глутамаксТехнологии LifeНомер 31331-093
Фетальная бычья сывороткаТехнологии LifeN° 10270-106
25 кД линейный полиэтиленимин (ПЭИ)Полинауки
OptiPrep Градиентная среда для плотности: йодиксанолсигмаД1556-250МЛ
ОптименТехнологии LifeN° 51985-026
Патсинос 1 Уотстон стеретактический атлас, четвертое изданиеЭльзевир
гг. ) гг.

Больше статей

Стереотаксическая хирургияпроцедура микроинъекцииподготовка вектора AAVэкспрессия альфа-синуклеинамодель болезни Паркинсонанейрохирургическая техникатаргетирование областей мозгапослеоперационный уход