$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Уход за животными
- В этом эксперименте используйте мышей C57BL/6J в возрасте от 5 до 6 недель (вес 20-25 г).
- Поддерживайте мышей в цикле свет/темнота 12 ч/12 ч и убедитесь, что они получают пищу и воду в неограниченном количестве. Обеспечьте одинаковое количество пищи и воды как симуляционной, так и ЧМТ группам на протяжении всего исследования.
- Приложите все усилия, чтобы свести к минимуму боль и дискомфорт животного.
2. Индукция черепно-мозговой травмы
- Введите кетамин (80-100 мг/кг)/ксилазин (10 мг/кг) для анестезии. Проверьте глубину анестезии с помощью глазного рефлекса или болевого рефлекса. Используйте искусственные слезы или смазывающую глазную мазь, чтобы предотвратить высыхание глаз.
- После анестезии положите мышь в положение лежа. Используйте грелку с регулируемой температурой, чтобы поддерживать температуру на уровне 37 °C во время операции и в течение 30 минут после ЧМТ.
- Сбрейте волосы в области разреза.
- Продезинфицируйте кожу головы 70% этанолом с помощью трех чередующихся скрабов, затем разрежьте кожу головы в сагиттальной плоскости.
- С помощью щипцов отведите разрез с обеих сторон и немного отделите надкостницу.
- С помощью маркера нарисуйте круг (диаметром 3 мм) на правой теменной области черепа, на расстоянии 2 мм от средней линии.
- Просверлите череп электродрели. Убедитесь, что этот шаг выполняется осторожно, чтобы защитить твердую мозговую оболочку от повреждения.
- Снимите костный лоскут и обнажите небольшое костное окно (3 мм в диаметре).
- Поместите пластиковую канюлю для травм (внутренний диаметр = 2,5 мм, длина = 8 мм) на трепанацию черепа и прикрепите канюлю к черепу с помощью стоматологического акрила.
- Заполните канюлю стерильным 0,9% NaCl (нормальным физиологическим раствором) с помощью шприца (5 мл), чтобы убедиться в отсутствии пузырьков в канюле.
- Включите осциллограф и усилитель и убедитесь, что на трубке высокого давления устройства LFPI нет пузырьков воздуха. Протестируйте устройство, подавая около 10 импульсов, пока оно не подаст устойчивый сигнал. Отрегулируйте угол исходного положения маятника, чтобы достичь интенсивности импульса около 2,0 атм.
- Подключите травматическую канюлю к устройству LFPI. Вызовите черепно-мозговую травму, нажав на спусковой крючок и отпустив маятник. Затем получите импульс и передайте его в твердую мозговую оболочку через всю закрытую систему трубок, заполненную жидкостью.
- Оперируйте мышей в фиктивной группе с помощью той же хирургической процедуры. Не выполняйте LFPI.