$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Вызвать анестезию
- Обезболивайте мышь кетамином (125 мг/кг) и ксилазином (10 мг/кг), вводимыми внутрибрюшинно.
2. Мониторинг жизненно важных показателей каждые 15 минут
- Следите за температурой, частотой дыхания и цветом кожи. Мышь должна быть теплой на ощупь. Кожица должна выглядеть розовой и хорошо перфузированной. Частота дыхания должна составлять 50–70 вдохов в минуту.
3. Предоперационные процедуры
- Взвесьте всех мышей за день до индукции травмы.
- Стерилизовать один набор хирургических инструментов путем автоклавирования для каждого испытуемого. Перед использованием простерилизуйте ударное устройство.
- Подготовьте клетку для восстановления, поместив чистую клетку на электрическую грелку, установленную на «низкий» уровень и расположенную таким образом, чтобы мыши могли отойти от жары после передвижения.
- Обустройте операционную в стерилизованном ламинарном колпаке.
- Расположите стереотаксическую операционную раму.
- Прикрепите ударное устройство к стереотаксической раме.
- Установите приводное устройство с желаемыми биомеханическими параметрами скорости и времени выдержки.
заметка: В этом протоколе описывается тяжелая черепно-мозговая травма с использованием ударного наконечника диаметром 3 мм через краниэктомию диаметром 5 мм со скоростью 2,5 м/с и временем выдержки 0,1 с. Широкий спектр биомеханических параметров может быть использован для индуцирования полного спектра ЧМТ.
- Надевайте новые средства индивидуальной защиты и стерильные перчатки.
- Сбрейте шерсть с места операции с помощью электрических машинок для стрижки.
- Нанесите защитную офтальмологическую мазь на глаза мыши, чтобы предотвратить травмирование роговицы и ее высыхание.
- Поместите мышь в операционную.
- Подготовьте кожу хирургическим скрабом на основе йода, чередуемым со спиртом три раза.
4. Применение контролируемого воздействия на кору головного мозга
- Надрежьте скальпелем волосистую часть головы на 1 см по средней линии, обнажая череп.
- Расположите мышь в стереотаксической операционной раме, закрепив двусторонние височные кости между миниатюрными ушными планками и зафиксировав резцы в зажиме резцов, создав стабильную трехточечную фиксацию головки мыши.
- Отведите кожу головы от места операции с помощью гемостата или фиксирующих щипцов, чтобы кожа головы не соприкасалась с сверлом во время краниэктомии.
- Определите сагиттальные и коронковые швы на обнаженном черепе.
заметка: Этот протокол центрирует краниэктомию на 2 мм слева от сагиттального шва и на 2 мм рострально от коронарного шва.
- Выполните краниэктомию с помощью дрели с трепанным сверлом.
- Чтобы выполнить краниэктомию, сначала активируйте сверло на максимальной скорости, а затем приложите сверло трепан перпендикулярно черепу в месте краниэктомии.
- Осторожно, равномерно надавите на сверло после контакта с черепом. Легкий «податливый» будет ощущаться, как только сверло проникнет в череп. Не проникайте в нижележащую твердую мозговую оболочку.
заметка: В этом протоколе используется сверло с трепаном диаметром 5 мм для выполнения краниэктомии.
- С помощью щипцов и иглы для подкожных инъекций небольшого калибра удалите костный лоскут, полностью обнажив нижележащую твердую мозговую оболочку.
- Поверните наконечник ударного элемента в рабочее поле и опустите его до тех пор, пока он не соприкоснется с обнаженной твердой мозговой оболочкой. Как только контакт будет установлен, контактный датчик инструмента издаст звуковой сигнал, чтобы предупредить хирурга о том, что контакт был установлен. При этом будет отмечена нулевая точка, от которой задана глубина деформации.
заметка: В этом протоколе используется ударный наконечник толщиной 3 мм для создания серьезной травмы. Наконечники размером до 1 мм могут быть использованы для нанесения более локализованной травмы.
- Втяните ударный наконечник и установите желаемую глубину удара, опустив положение ударного элемента на стереотаксической раме.
заметка: В этом протоколе мы описываем тяжелую травму, устанавливая глубину деформации на 2 мм.
- Нанесите травму, активировав ударный элемент на исполнительном устройстве.
- Поверните ударное устройство за пределы поля и снимите животное со стереотаксической рамы.
5. Закрытие хирургического участка
- Контролируйте кровотечение из черепа и поврежденной кортикальной поверхности с помощью прямого давления со стороны стерильного аппликатора с ватным наконечником.
- Высушите череп стерильным аппликатором с ватным наконечником.
- Закройте кожу головы над местом черепной эктомии с помощью имеющегося в продаже хирургического клея или монофиламентного ><шва.
заметка: В этом протоколе используется ветеринарный хирургический клей для закрытия кожи головы. Костный лоскут не заменяется и выбрасывается.
6. Послеоперационный уход и мониторинг
- Проводят послеоперационное обезболивание (например, бупренорфин замедленного высвобождения в дозе 0,1–0,5 мг/кг вводят подкожно, обеспечивая 72 ч пролонгированной анальгезии).
- Поместите животное в положение для восстановления бокового пролежня в чистую предварительно прогретую клетку.
- Наблюдайте за животными до тех пор, пока они не проснутся и не станут подвижными, затем верните каждую мышь в ее домашнюю клетку.
- Обеспечьте свободный доступ к еде и воде. Обычное потребление пищи и воды обычно возобновляется в течение одного-двух часов после травмы.
- Измеряйте массу тела каждые три дня на протяжении всего эксперимента.