$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.
1. Хирургия грудной гемисекции
- Надевайте соответствующие средства защиты (перчатки, маску и халат) для поддержания асептической среды во время операции. Очистите операционную область спиртовыми салфетками и наложите на операционное поле стерильные хирургические простыни. Простерилизуйте хирургические инструменты и поместите на операционное поле.
- Обезболивание крысы под смесью газообразного изофлурана (3% индукции, 0,5−3% поддержания) и кислорода (1 л/мин). Подтвердите надлежащую глубину хирургической анестезии, проверив отсутствие защемления пальцев ног и рефлекторных реакций роговицы. Непрерывно контролируйте крысу в течение всей процедуры и регулируйте количество анестетика по мере необходимости, чтобы поддерживать глубину хирургической анестезии.
- Выбрейте спинной ствол между бедром и шеей, поместите крысу на операционное поле, продезинфицируйте место разреза спиртовыми салфетками и раствором провйода и поддерживайте температуру тела на уровне 37 °C с помощью грелки с обратной связью, контролируемой ректальным термометром.
- Нанесите офтальмологическую мазь на глаза, чтобы сохранить их увлажненными, и при необходимости наносите повторно во время операции.
- Сделайте надрез на коже длиной 2,5 см, обложив скальпелем позвонки Т6−Т10. Втяните кожу и поверхностный жир с помощью тупых ножниц для препарирования.
ПРИМЕЧАНИЕ: Позвоночные сегменты T6−T10 могут быть идентифицированы либо рострально путем осторожной пальпации дорсальных сегментов позвоночника от основания черепа, начиная с заметного выступа 2nd} грудного позвонка, либо каудально путем пальпации самого заднего плавающего ребра, которое вызовет движение в 13th грудных позвонков.
- Отделите паравертебральные мышцы, прикрепленные к дорсальной стороне позвонков T7−T9, с помощью тупых ножниц для рассечения и самоудерживающегося ретрактора. Очистите и удалите остатки ткани с помощью тонких щипцов и аппликаторов с ватными наконечниками, чтобы обнажить остистые отростки и пластинки позвонков.
ПРИМЕЧАНИЕ: Этот и последующие шаги в значительной степени облегчаются микроскопической визуализацией (~5−15x).
- Аккуратно разрежьте фасетки (зигапофизные суставы) с обеих сторон на позвонках Т7 и Т8 с помощью тонких костных триммеров. Разрежьте дорсальную соединительную ткань между пластинками позвонков Т8 и Т9 поверхностно скальпелем (глубиной 1 мм), стараясь не повредить нижележащий канатик.
- Удалите остистый отросток позвонка Т8 с помощью костных триммеров. Изогнутыми гемостатическими щипцами, тщательно зажатыми на остистом отростке Т7, слегка повернуть каудальный конец пластинки Т8 слегка рострально (~20°), ввести костные триммеры под пластинку Т8 и сделать разрез по средней линии, проходящий вдоль пластинки. Продолжайте ламинэктомию, повторяя разрезы на левой и правой стороне пластинки позвонка медиально к поперечным отросткам, чтобы обнажить спинной мозг.
ПРИМЕЧАНИЕ: Будьте осторожны при удалении всех костных фрагментов, образовавшихся в результате ламинэктомии.
- Капните лидокаин (2%, 0,1 мл) в обнаженный спинномозговой канал и удалите твердую мозговую оболочку, покрывающую спинномозговой сегмент Т8, с помощью тонких щипцов и ножниц для иридэктомии. Повторите введение лидокаина в обнаженный спинной мозг и определите среднюю линию спинного мозга путем визуализации центральной линии, созданной между остистыми отростками, проходящей между обнаженным позвонком Т7−Т9.
ПРИМЕЧАНИЕ: Наряду с остистыми отростками на Т7 и Т9, обнаженные ганглии дорсальных корешков на Т8 также могут быть использованы для помощи в идентификации средней линии. Игла 30 G может быть помещена в среднюю линию спинного мозга для последующей гемисекции.
- Рассекающим ножом кровоизвестняйте спинной мозг от средней линии к одной стороне. Будьте осторожны, чтобы не перерезать переднюю спинномозговую артерию с вентральной стороны (не оказывайте сильного давления на тело позвонка). Используя ножницы для иридэктомии, осторожно разрежьте все оставшиеся ткани на поврежденной стороне спинного мозга, чтобы убедиться, что вентролатеральный квадрант надлежащим образом пересечен.
- Поместите стерильную гемостатическую губку, пропитанную физиологическим раствором, (~6 x 2 мм) в открытую полость над спинным мозгом и зашите мышечные слои (4-0 полиглактина 910). Далее зашите кожу вокруг места разреза.
- Обеспечьте адекватное обезболивание (бупренорфин 0,05 мг/кг подкожно [подкожно]), антибиотик (энрофлоксацин, 10 мг/кг в.к.) и восполните потерянную жидкость с помощью 5 мл раствора лактата Рингера (внутрибрюшинно [в/в]) сразу после операции.
- Извлеките крысу из наркоза. Поместите крысу в теплое помещение под грелку или лампу (~33 °C) до тех пор, пока животное полностью не придет в себя.
- Обеспечьте дополнительную обезболивание ежедневно в течение первых 3 послеоперационных дней и постоянно следите за признаками боли, потерей веса, неправильным мочеиспусканием, инфекцией, проблемами с заживлением ран или аутофагией.