Симпатическая денервация почечных артерий на мышиной модели гипертензии, индуцированной ангиотензином II

Аннотация

Источник: Wang, M., et al., Улучшенная денервация почек смягчила гипертензию, вызванную инфузией ангиотензина II. J. vis. exp. (2022)

В этом видео демонстрируется процедура симпатической денервации почечной артерии на мышиной модели гипертензивной мыши, вызванной ангиотензином II, с использованием фенола для нарушения функции симпатического нерва и снижения артериального давления.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Двусторонняя почечная денервация

1. Выберите мышей с повышенным артериальным давлением (АД) ≥140/90 мм рт.ст. или увеличением систолического АД/диастолического АД на 25% через 1 неделю после инфузии Ang II.
2. Запишите вес животного перед операцией и выберите животных с минимальным весом 24 г для операции по денервации почек.
3. Обезболите мышей с помощью пентобарбитала натрия. Подтвердите глубину анестезии отрицательным рефлексом защемления пальца ноги.
4. Удалите волосы на животе с помощью бритвы. Выполняйте эту процедуру осторожно и тщательно, чтобы избежать хирургического загрязнения.
5. Поместите мышей на операционный стол, удерживая брюшную полость вверху, и зафиксируйте ее конечности скотчем. Продезинфицируйте кожу живота повидон-йодом, а затем продезинфицируйте три салфетки с 70% этанолом.
6. Сделайте вентральный разрез живота по средней линии живота диаметром 2 см с помощью лезвия скальпеля. Оттяните кишечник с помощью марли, смоченной в физиологическом растворе 37 °C, чтобы обнажить левую почечную артерию. Аккуратно, но прямо рассеките жир от почечной артерии с помощью изогнутого пинцета. (Рисунок 1A-C).
7. Стерильными острыми ножницами разрежьте бумагу для взвешивания в прямоугольник размером с почечную артерию. Для справки разрежьте бумагу для взвешивания в том же размере, что показано пунктирной линией на рисунке Рисунок 1C.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Важной частью операции является попытка разрезать несколько кусков бумаги для взвешивания за раз, чтобы сохранить одну и ту же форму.
8. Опустите бумагу для взвешивания в 10% раствор фенола/этанола не менее чем на 30 с. Закройте поверхность левой почечной артерии и оберните сосуд бумагой для взвешивания, удерживая ее в течение 2 минут (Рисунок 1D). Используйте марлю для защиты окружающих тканей, чтобы бумага для взвешивания не касалась окружающих почек и кишечника.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Раствор фенола стабилен в пластиковых пробирках, но не в стеклянных флаконах. Поэтому раствор должен быть свежим для каждого эксперимента.
9. Проделайте ту же процедуру для правой почечной артерии. Выполняйте фиктивную операцию с помощью бумаги для взвешивания, погруженной в физиологический раствор.
10. Переместите мышцы в исходное положение и закройте брюшину швами 6-0 Викрилом в прерывистом шве. Затем закройте кожу прерывистыми 4-0 нейлоновыми швами. Наблюдайте за всеми мышами до полного выздоровления.

2. Послеоперационный уход

1. Нанесите на разрез повидон-йод и положите животное в утепленное электрическое одеяло для восстановления и послеоперационного контроля.
2. Наблюдайте за мышами два раза в день, чтобы оценить покраснение, отек и боль или абдоминальную инфекцию. Давайте мелоксикам (0,5 мг/кг, п/к) всем мышам примерно за 1 ч до и через 24 ч после процедуры RDN.

Результаты

Рисунок 1: Порядок проведения RDN с бумагой для взвешивания. (A,B) Анатомические изображения почечной артерии у мышей C57BL/6 (ex vivo). (C) Часть в пределах двух пунктирных линий относится к области, покрытой бумагой для взвешивания. (D) Покрытие поверхности двусторонней почечной артерии соответствующей бумагой для взвешивания, погруженной...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Ангиотензин II	Сангон Биотех	CAS:4474-91-3	Чтобы сделать модель анимола для гипертоника
Анализ артериального давления	Visitech Systems	БП-2000	Измерение артериального давления мышей
Мини-осмотический насос	Корпорация DURECT	CA 95014	Наполнить ангиотензином II
Бумага для взвешивания	Сангон Биотех	F512112	Разрушить почечный нерв с помощью весовой бумаги, погруженной в фенол; https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F512112.