Индуцирование ишемического инсульта через окклюзию средней мозговой артерии с помощью резьбового болта

Аннотация

Источник: Liu, P., et al., Доклиническая модель для оценки восстановления мозга после острого инсульта у крыс. J. Vis. Exp. (2019)

В этом видео показан процесс индуцирования ишемического инсульта на модели крысы путем окклюзии средней мозговой артерии (МКА) с помощью резьбового болта. Процедура включает в себя перевязку сонных артерий, вставку нитевого болта в наружную сонную артерию и блокирование кровотока от MCA к мозгу, что приводит к гибели нейронов и имитирует ишемический инсульт.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Создание модели односторонней окклюзии/реперфузии средней мозговой артерии (MCAO/R) у крыс

ПРИМЕЧАНИЕ: Во время операции осторожно используйте микрощипцы, чтобы предотвратить разрыв кровеносного сосуда. Избегайте повреждения нервов и других кровеносных сосудов в шее крысы, когда сосуд изолирован. Необходимо позаботиться о том, чтобы предоставить соответствующую асептическую технику для всех хирургических процедур по выживанию. Техника, показанная далее в видео, должна быть отработана на протяжении всей процедуры.

1. На протяжении всей операции поддерживайте температуру тела крыс на уровне 37,0 ± 0,5 °C в термостате для мелких животных. Подготовьте четыре шва по 6 см 5-0.
2. Установите скорость потока кислорода в наркозном аппарате для мелких животных (с устройством для очистки отходящих газов) на уровне 0,4−0,6 л/мин и концентрацию изофлурана 5%. Поместите крысу в наркозный аппарат.
3. После того, как животное упало в обморок, поместите крысу на хирургический фиксирующий стол. Подсоедините рот крысы к маске наркозного аппарата (скорость потока кислорода остается неизменной; отрегулируйте концентрацию изофлурана до 3%). Подтвердите, что животное ввело глубокую анестезию, наблюдая за отсутствием напряжения конечностей, роговичных рефлексов и боли.
4. Зафиксируйте его конечности лежать на операционном столе с помощью бумажных бинтов (или других инструментов).
5. Снимите шейный покров с помощью электробритвы и простерилизуйте 75% спиртом (лучше йодофором). Зафиксируйте рот крысы крючком.
6. Отрежьте 2−3 см по центральной продольной форме шейки офтальмологическими ножницами.
7. Отделите общую сонную артерию. Отделите подкожную мышцу с помощью офтальмологических щипцов. Используйте самодельный ретрактор, чтобы полностью обнажить поле зрения. После отделения передней мышцы трахеи офтальмологическими щипцами отделите вдоль правого грудино-ключично-сосцевидного сухожилия до тех пор, пока не станет видна общая сонная артерия.
8. Изолируйте общую сонную артерию, наружную сонную артерию и внутреннюю сонную артерию с помощью офтальмологических щипцов. Перевязать общую сонную артерию (твердый узел), наружную сонную артерию вдали от сердечного конца (жесткий узел) и внутреннюю сонную артерию (рыхлый узел) швами 5-0. Выровняйте наружную сонную артерию возле конца сердца швами 5-0.
9. Вставьте болт с резьбой. Прорежьте небольшое отверстие в наружной сонной артерии с помощью офтальмологических ножниц и аккуратно вставьте болт с резьбой. Перевязать шов наружной сонной артерии, которая была в рыхлом узле, и отрезать наружную сонную артерию.
   1. Ослабьте ослабленный узел внутренней сонной артерии и продолжайте вводить резьбовой болт до начала средней мозговой артерии (нанесен шов). Затем отрежьте болт с обнаженной резьбой.
10. По достижении ишемического времени (2-3 ч) зафиксировать перелом наружной сонной артерии одним микрощипцом и аккуратно вытащить болт с нитью другим микрощипцом. Когда передний конец резьбового болта будет полностью отведен от внутренней сонной артерии, перевяжите наружную сонную артерию, которая была выстлана швами 5-0, а затем полностью вытяните резьбовой болт.
11. Ослабьте общую сонную артерию и нанесите ~50 000 ЕД порошка пенициллина натрия на поверхность раны, чтобы предотвратить инфекцию. Швы подкожных мышц и кожи 4 швами.
12. Дайте ~0,2 мл стерильного физиологического раствора крысе перорально с помощью шприца объемом 1 мл (лучше инъекции SQ-PEN), чтобы предотвратить послеоперационную нехватку воды после помещения крысы обратно в клетку.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Анатомический микроскоп	Leica (Германия)	С8	Микроскопический операционный прибор
Электробритва	Шанхай Юянь Сайентификал Инструментс Ко., Лтд.	3000#	Удаление шерсти с шеи крыс
Программное обеспечение Image Pro Plus	Медиа Кибернетика Инк.	6	Анализ объема инфаркта
Изофлуран	RWD Медико-биологические науки	217170702	Обезболивающий газ
Микрощипцы	Шанхай Цзиньчжун Медикал Девайс Ко., Лтд.	10 см	Сосудистые микроманипуляции
Микроножницы	Шанхай Цзиньчжун Медикал Девайс Ко., Лтд.	10 см	Сосудистые микроманипуляции
Офтальмологические щипцы	Шанхай Цзиньчжун Медикал Девайс Ко., Лтд.	10 см	Вспомогательная анатомия кожи и мышц
Офтальмологические ножницы	Шанхай Цзиньчжун Медикал Девайс Ко., Лтд.	10 см	Использование для разрезания кожи шеи
Аппарат для анестезии мелких животных	Шанхай Юянь Сайентификал Инструментс Ко., Лтд.	ABM3000	Аппарат для газовой анестезии
Термостат для мелких животных	Пекин Дамида Технолоджи Ко., Лтд.	DM.7-YLS-20A	Для поддержания постоянной температуры тела животного во время работы
Хирургические ножницы	Шанхайское медицинское устройство Co., Ltd.	16 см	Использование для обезглавливания и удаления мозга
Шов	Шанхай Цзиньхуань Медикал Девайс Ко., Лтд.	4-0 / 5-0	Использование для наложения кожных и мышечных швов / Использование для перевязки сосудов
Резьбовой болт	Пекин Синонтех Ко. Лтд.	2636/2838/3040/3043-A4	Закупорка средней мозговой артерии у крыс