Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Оценка мышечного сокращения с помощью нервно-мышечных блокаторов

694 просмотров

⸱

8 июля 2025 г.

В этой статье

Аннотация

Источник: Lin, C. U., et al., In vitro нервно-мышечное соединение, индуцированное человеческими индуцированными плюрипотентными стволовыми клетками. J. Vis. Exp. (2020)

В этом видео демонстрируется оценка мышцы с использованием культивируемых моторных нейронов, шванновских клеток и миотрубок с последующим лечением нервно-мышечным блокатором для подавления сокращения. Графика с цветовой кодировкой времени показывает графику с цветовой кодировкой. Красным цветом обозначено самое быстрое движение, а синим — самое медленное.

Протокол

1. Сокращение мышц и лечение кураре

  1. Чтобы вызвать сокращение миотрубки, добавьте 25 мМ хлорида кальция (CaCl2) в питательную среду. Движение миотрубок можно наблюдать через 1\u20122 мин.
  2. Поместите 6-луночный планшет на предметный столик инвертированного микроскопа. Запишите фильм о сокращении миотрубки с помощью микроскопии живых клеток.
  3. Чтобы остановить сокращение миотрубки, добавьте кураре в питательную среду (300 нг/мл). Затем запишите видеоролик как шаг 1.2.
  4. Откройте файл фильма с помощью программного обеспечения для анализа векторов движения, затем нажмите кнопку «Анализ движения», чтобы проанализировать фильм.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Сокращение миотрубок показано в виде графика времени-движения. Видеоролики имеют цветовую кодировку, показывающую скорость движения миотрубок. Искрящиеся сигналы с цветовой кодировкой указывают на движение миотрубок, где красный цвет показывает самую быструю скорость движения, а синий цвет показывает самую медленную скорость движения.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Среда, факторы роста и реагентыТоварБрендКошка. Число
B27, GibcoGibco12587-001
BDNFСистемы исследований и разработок248-BD
ВКМ, Матригель (сниженный фактор роста)Корнинг356230
GDNFСистемы НИОКР212-GD
Ионный коатерJEOLJEC3000FC
Микроскопия живых клетокНиконМикроскоп Eclipse Ti
Программное обеспечение для анализа векторов движенияСониSI8000
N2, GibcoGibco17502-048
Нейробазальная средаGibco21103-049
NT3Системы НИОКР267-N3

Теги

Нервно-мышечный синапсхлорид кальциямикроскопия живых клетокцветовое кодирование перемещениясокращение миотрубкиацетилхолиновые рецепторыинвертированный микроскопобработка кураремином