Индуцирование тромботического инсульта с помощью гипоксии и ишемии на мышиной модели

Аннотация

Источник: Sun, Y. Y., et al., Модель тромботического инсульта, основанная на транзиторной церебральной гипоксии-ишемии. J. Vis. Exp. (2015).'

В этом видео демонстрируется процедура репликации тромботического удара на мышиной модели путем блокирования правой общей сонной артерии и воздействия на мышь среды с низким содержанием кислорода. Этот процесс снижает приток крови и кислорода к мозгу, вызывая образование тромбов и повреждение мозга.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Настройка

1. Подготовьте хирургическую кровать на грелке, подключенной к тепловому насосу при температуре 37 °C, не менее чем за 15 минут до операции. Поместите шейный валик с помощью цилиндра шприца объемом 3 мл на хирургическую кровать. Приготовьте анестезиологический газ с 2% изофлураном в медицинском воздухе.
2. Подготовьте автоклавные щипцы, ножницы, микроиглодержатели, гемостат, ватные палочки и швы. Также приготовьте тканевый клей и глазную мазь.
3. Настройте систему гипоксии и регуляторы температуры с помощью нагревательной лампы и ректального зонда. Приготовьте газ для гипоксии с 2% изофлураном в 7,5% O₂, сбалансированным на 92,5% N₂.
4. За час до операции мышам проводят обезболивание путем подкожной инъекции мелоксикама с медленным высвобождением (4,0 мг/кг).

2. Транзиторная церебральная гипоксия-ишемия (рисунок 1B)

1. Обезболите 10-13-недельных самцов мышей C57BL/6 массой от 22 до 30 г в анестезиологической индукционной камере 3% изофлураном до тех пор, пока животное не перестанет реагировать на сдавливание ногой, а затем удалите шерсть на правой шее с помощью электронной бритвы.
2. Поместите мышей на операционную кровать, соединенную с 2% изофлураном, в медицинский воздух со скоростью потока 2 л/мин. Закрепите передние конечности, вытянутые вдоль шеи, с помощью медицинской ленты.
3. Очистите место операции для разреза бетадином, затем спиртом, а затем ватными палочками.
4. Под препарирующим микроскопом сделайте правошейный разрез на 0,5 см с помощью прямых щипцов и микроножниц примерно в 0,2 см латерально от средней линии кожи.
5. С помощью пары тонко зазубренных щипцов раздвиньте фасцию и ткань, чтобы обнажить правую общую сонную артерию (ОККА). Осторожно отделите ПККА от блуждающего нерва с помощью пары тонких гладких щипцов.
6. Завяжите два предварительно нарезанных шелковых швов 5-0 (снимаемых) на RCCA, а затем зашиваем кожу с помощью нейлоновых монофиламентных швов 4-0 (Рисунок 1C).
7. Нанесите глазную мазь на оба глаза, чтобы предотвратить сухость.
8. Быстро переведите мышей в систему гипоксии и поместите их носы и рот в маску для лица с 2% изофлураном в 7,5% O₂} со скоростью потока 0,5-1 л/мин в течение 30 минут.
   1. Во время гипоксии используйте регуляторы температуры с нагревательными лампами для контроля ректальной температуры на уровне 37,5 ± 0,5 °C. Контролируйте частоту дыхания со скоростью 80-120 вдохов/мин. Поддержание температуры тела выше 37 °C во время гипоксии важно для создания последовательного инфаркта головного мозга. Низкая частота дыхания обычно возникает после 20 минут гипоксии. Снимите маску для лица и обеспечьте нормальную подачу воздуха, если частота дыхания упадет ниже 40. Это занимает 1-2 минуты и не учитывается в 30-минутной продолжительности гипоксии

Результаты

Рисунок 1: Процедура лечения транзиторной гипоксии-ишемии головного мозга (tHI) у взрослых мышей. (А) Триада Вирхова, которая способствует тромбозу, включает застой кровотока, повреждение эндотелия и гиперкоагуляцию крови. (B) Принципиальная схема процедуры инсульта tHI. Два освобождаемых узла завязывали на правую общую сонную артерию (ОСА) с последующей подачей 7,5% кислорода через носовой конус в т...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Взрослые самцы мышей	Чарльз Ривер	C57BL/6	10~13 недель (22~30 г)
Мобильная система анестезии лабораторных животных	VetEquip	901807	Анестезия
Баллон для медицинского воздуха (сжатый)	Воздушный газ	UN1002	Анестезия
Изофлуран	Медицинская помощь Piramal	НДЦ 66794-013-25	Анестезия
Многостанционная система анестезии лабораторных животных	Хирургия	V703501	Система гипоксии
7,5% O2 уравновешивается 92,5% N2 танка	Воздушный газ	ООН1956	Система гипоксии
Регулятор температуры с нагревательной лампой	Коул Пармер	EW-89000-10	Регуляторы температуры
Ректальный зонд	Коул Пармер	NCI-00141PG	Регуляторы температуры
Препарирующий микроскоп	Олимп	SZ40	Хирургическая установка
Тепловой насос с грелкой	Гаймар	ТП700	Хирургическая установка
Тонко изогнутые щипцы (зубчатые)	FST	11370-31	Хирургический инструмент
Тонко изогнутые щипцы (гладкие)	FST	11373-12	Хирургический инструмент
Микроножницы	FST	15000-03	Хирургический инструмент
микроиглодержатели	FST	12060-01	Хирургический инструмент
Halsted-Mosquito hemostats	FST	13008-12	Хирургический инструмент
5-0 шелковый шов	Гарвардский аппарат	624143	Хирургические принадлежности
4-0 Нейлоновая мононить шовная	СМОТРИТЕ	766B	Хирургические принадлежности
Тканевый клей	Лаборатории Эбботта	NC9855218	Хирургические принадлежности
Мазь Puralube Vet	Фишер	NC0138063	Профилактика сухости глаз