Методика индуцирования посттравматических припадков у мышиной модели с помощью травматического повреждения при падении веса

Аннотация

Источник: Шандра, О. et al., Индуцирование посттравматической эпилепсии у мышей с повторяющейся диффузной черепно-мозговой травмой. J. Vis. Exp. (2020)

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Процедура сброса веса

1. Поместите мышь в индукционную камеру. Установите расход кислорода и вакуума на 1 л/мин и уровень газообразного изофлурана на 3%−5%. Обезболить мышь на 5 мин.
2. Извлеките мышь из индукционной камеры и положите ее на поролоновую подушку. Тест на отсутствие реакции на пощипывание пальца ноги или хвоста.
3. Подкожно вводите анальгетик (0,1 мг/кг бупренорфина). Если операция электроэнцефалографии (ЭЭГ) проводится в тот же день, введите бупренорфин подкожно в сочетании с нестероидным противовоспалительным карпрофеном (5 мг/кг).
4. Вводите раствор лактата натрия (3 мкл на грамм веса животного) подкожно до или после последнего удара. Раствор лактата натрия можно смешивать с анальгетиками для быстрого введения за одну инъекцию.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Раствор лактата натрия содержит смесь хлорида натрия, хлорида калия, хлорида кальция и лактата натрия в воде. Этот этап помогает восполнить жидкость и электролиты, способствуя восстановлению.
5. Поместите головку мыши под трубку для сброса груза (Рисунок 1A) и поместите плоский диск из нержавеющей стали (диаметр 1,3 см, толщина 1 мм и вес 880 мг) в центр головы, между линией глаз и ушей.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Этот диск рассеивает удар по поверхности черепа (Рисунок 1B).
6. Снимите штифт в трубке для сброса груза, чтобы освободить стержень весом 100 г с высоты 50 см. Чтобы вызвать фиктивную травму у контрольных мышей, извлеките стержень груза из трубки, чтобы предотвратить случайное отпускание штифта и падение веса.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Голова животного должна быть расположена ровно, чтобы стержень свободно падал на всю поверхность диска.
7. Положите животное без сознания на спину для восстановления на грелку, покрытую стерильным абсорбирующим полотенцем из полиподкладки. Время восстановления выпрямляющего рефлекса (т.е. время, которое требуется мыши, чтобы выпрямиться со спины) может быть измерено как показания за время, проведенное в бессознательном состоянии.

Результаты

Рисунок 1: Мышиная модель повторяющейся диффузной черепно-мозговой травмы (ЧМТ). (A) Устройство для сброса веса. (a1) Трубка для сброса веса. (a2) Удилище весом 100 г. (a3) Штифт, удерживающий стержень. (a4) Веревка для поднятия стержня вверх при изменении высоты или снятии стержня с трубки сброса груза. (a5...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Бупренорфин	Par Pharmaceuticals, Cos. Inc., Спринг Вэлли, Нью-Йорк, США	60969
C57BL/6 мышей	Харлан/Энвиго Лабораториз Инк		кобель, 12-16 недель
C57BL/6 мышей	Лаборатория Джексона		кобель, 12-16 недель
Карпрофен	Zoetis Services LLC, Парсиппани, Нью-Джерси, США	26357	ПРИМЕЧАНИЕ: данный препарат добавляется во время снижения веса только в том случае, если в тот же день будет проведена имплантация стереотаксических электродов
Жидкость Fluriso для ингаляционной анестезии	MWI Veterinary Supply Co., США	502017
Диск из нержавеющей стали			Сделано на заказ
Стерильные впитывающие прокладки для полотенец с полиподкладкой	Кардинал Хелс, США	3520