Все процедуры, связанные со сбором образцов, были выполнены в соответствии с рекомендациями института IRB.
ПРИМЕЧАНИЕ: Протокол описывает симметричную двухполушарную процедуру разрезания мозга для посмертной оценки мозга, завершенную для невропатологических исследований на людях. Подробное описание аппаратов, инструментов, материалов и принадлежностей, необходимых для разрезания мозга человека, будет исключено. Материалы и принадлежности для вскрытия мозга выбираются по усмотрению одного исследователя и основаны на инструментах для аутопсии, разрешенных или одобренных в каждом исследовательском учреждении. Минимальный набор инструментов и материалов, необходимых для этой процедуры, описан в таблице материалов/оборудования. Конкретные процедуры разрезания и меры предосторожности при подозрении на трансмиссивные заболевания головного мозга, такие как болезнь Крейцфельда-Якоба у человека, выходят за рамки данной рукописи и доступны из других источников.
1. Симметричное межполушарное разрез мозга
Примечание: Убедитесь, что мозг получил необходимую фиксацию тканей (используя, например, нейтральный буферизованный 10% формалин) в течение двух-трех недель, в зависимости от периагональных, метаболических (т.е. pH) и тканевых (т.е. температурных) условий. Тем не менее, для корреляционных исследований визуализации и патологии был предложен более длительный период фиксации (>5,4 недели).
- Поместите мозг на плоскую поверхность, обращенную к исследователю, так, чтобы лобные полюса были направлены в противоположном направлении по отношению к исследователю.
- Расположите мозг так, чтобы обеспечить полную и четкую визуализацию всех корковых извилин и борозд всего головного мозга (Рисунок 1а).
- Во-первых, следует обратить внимание на аномалии менингеального круга, макроскопические межполушарные асимметрии (возможные признаки очаговых, долевых или генерализованных полушарных явлений атрофии), макроскопические поражения тканей (т.е. опухоли или грыжи), врожденные пороки развития, аномалии сосудов и любые другие возможные аномалии или необычные проявления мозговой поверхности><.
заметка: Для получения подробных описаний того, как оценить человеческий мозг, обратитесь к коммерчески доступным учебникам по невропатологии и руководствам по аутопсии.
2. Последовательность протоколов
- Поверните лицом фронтальные полюса в сторону от исследователя, а поверхностные части полушарий (конечный мозг) должны быть обращены к исследователю. Сделайте столько цифровых снимков, сколько необходимо в каждом конкретном случае, чтобы задокументировать возможные макроаномалии и учесть возможные клинико-нейроанатомические и пострезанные соображения. Попросите научного сотрудника сделать цифровые фотографии перпендикулярно мозгу, чтобы захватить всю поверхность коры головного мозга (рис. 1a - c).
- Перед разрезанием мозга отметьте прецентральные и постцентральные корковые извилины чернилами или цветными иглами (рис. 1b).
заметка: Эта процедура способствует более непосредственному распознаванию моторной и соматосенсорной первичной коры головного мозга после разреза.
- Поверните мозг на 180 градусов, при этом он должен быть направлен в одном направлении (т.е. лобные полюса должны быть обращены в сторону от исследователя). Внимательно осмотрите основание головного мозга. Обратите особое внимание на состояние цереброваскулярных систем (т.е. базилярных и позвоночных артерий и виллизилового круга) и черепно-мозговых нервов на уровне выхода/входа ствола мозга. Ухаживайте за обонятельными луковицами и трактами с особой осторожностью, чтобы избежать разрыва тканей из-за их крайней хрупкости.
- Сделайте столько цифровых снимков, сколько необходимо в каждом конкретном случае, чтобы задокументировать возможные макроаномалии и учесть возможные клинико-нейроанатомические и пострезанные соображения. Попросите научного сотрудника сделать цифровые фотографии перпендикулярно мозгу, чтобы запечатлеть всю поверхность коры головного мозга и ствола мозга.
- Лицом к основанию мозга и с помощью скальпеля разрежьте ствол мозга поперечно на уровне верхней части моста (как можно ближе к основанию головного мозга). Внимательно осмотрите СН (т.е. на наличие бледности) и другие соседние строения. Обратите внимание, возможно, с помощью диктофона, на любой необычный внешний вид мозга по сравнению с нормальным мозгом.
- Снова поверните мозг на 180 градусов и с помощью острого ножа разделите два полушария, разрезав мозолистое тело по центру через медиальную продольную щель и следуя лобно-затылочному направлению. Осмотрите каждую сторону каждого полушария на предмет возможных аномалий (например, увеличения желудочков, пороков развития, размягчения тканей, опухолей и т. д.). Смотрите рисунок 2а.
- Сделайте столько цифровых снимков, сколько необходимо в каждом конкретном случае, чтобы задокументировать возможные макроаномалии и учесть возможные клинико-нейроанатомические и постмонтажные соображения. Попросите научного сотрудника сделать цифровые фотографии перпендикулярно мозгу, чтобы захватить всю поверхность коры головного мозга. Обратите внимание на любую необычную особенность мозга по сравнению с нормальным мозгом.
- Расположите два полушария плашмя, лежа на их медиальных сторонах, лобными долями в сторону от исследователя, как показано на рисунке 2b. Расположите их так, чтобы их центры соприкасались (в том числе в случае выраженной полушарной асимметрии).
- С помощью острого ножа вручную прорежьте оба полушария головного мозга, начиная с лобных полюсов и двигаясь к затылочным полюсам по всей длине полушарий. Получите две серии блоков мозговой ткани толщиной 1 см (около 18 плит для каждого полушария).
- Поместите мозговые плиты в анатомически организованной (лобно-затылочной направлении) последовательности на отдельную плоскую поверхность. Используйте белую поверхность с напечатанной на ней линейкой для лучшего контраста при фотографировании. Отобразите две серии церебральных плит анатомически симметричным образом (лобно-затылочное направление), обеспечив видимость их корональных поверхностей для прямого осмотра глаза и цифровой фотографии (рис. 3a). Используйте режущие поверхности с напечатанными миллиметровыми сетками с обеих сторон, чтобы более точно локализовать структуры мозга, размеры и возможные аномалии.
- Сделайте столько цифровых снимков, сколько необходимо в каждом конкретном случае, чтобы задокументировать возможные макроаномалии и учесть возможные клинико-нейроанатомические и пострезанные соображения. Попросите научного сотрудника сделать цифровые фотографии перпендикулярно мозгу, чтобы захватить всю поверхность коры головного мозга. Делайте заметки (возможно, с помощью диктофона) о любом необычном аспекте мозга по сравнению с нормальным мозгом.
- С помощью острого скальпеля вручную препарируйте небольшие прямоугольные блоки мозговой ткани для каждой установленной области мозга. Следуйте предложенной схеме сбора церебральных областей, описанной в таблице 1.
- Поместите каждый блок ткани в отдельно помеченные гистокассеты.
заметка: Каждый блок мозговой ткани должен быть разрезан так, чтобы он максимально соответствовал максимальному объему стандартной гистокассеты (30 x 20 x 4 мм3).
- Маркируйте гистокассеты, используя обезличивающий код для каждого случая и используя конкретные нейроанатомические идентификаторы (не используйте случайные буквы или цифры для разных видов мозга; вместо этого всегда используйте одни и те же региональные анатомические названия или соответствующие номера, как показано в таблице 1). Создание деидентифицирующих кодов, например, путем генерации случайных или полуслучайных чисел для каждого случая (например, BRC 130, где 5B остается для мозга, R остается для ресурса, C остается для центра, а 130 — это прогрессивное присоединение или AD160001, где AD означает «исследование болезни Альцгеймера», 16 — это год, когда было проведено вскрытие (2016), и 0001 порядковый номер образца присоединения).
заметка: Этот шаг очень полезен для будущих исследователей. Сохраните легенду и укажите полушарие (L = левое полушарие, R = правое полушарие). Используйте два разных цвета гистокассет, устанавливая определенный цвет для каждого полушария.
- Сделайте столько цифровых снимков, сколько необходимо в каждом конкретном случае, чтобы задокументировать возможные макроаномалии и учесть возможные клинико-нейроанатомические и постмонтажные соображения. Попросите научного сотрудника сделать цифровые фотографии перпендикулярно мозгу, чтобы захватить всю поверхность коры головного мозга. Обратите внимание на любую необычную особенность мозга по сравнению с нормальным мозгом.
- Сделайте цифровые снимки (столько, сколько необходимо или желательно) всего разрезанного мозга и связанных с ним гистокассет.
Таблица 1. Схема разрезания в двух полушариях. В этой таблице показана одна анатомическая область для рассечения в левом и правом полушариях мозга. Симметричное разрез в двух полушариях может быть выполнено на свежих и неподвижных мозгах.
| Нейроанатомическая область | ярлык | Осталось неподвижным | Исправлено справа | Оставленная замороженная | Прямо холодное сердце |
| Обонятельная луковица | Обь | | | | |
| Полярная лобная кора | Пфк | | | | |
| Средняя лобная извилина | МФГ | | | | |
| Орбитофронтальная извилина | ОФГ | | | | |
| Нижняя долька теменной коры | ПКЛИ | | | | |
| Верхняя височная кора | НТЦ | | | | |
| Средневисочная кора | ЦУП | | | | |
| Передняя поясная кора | АКК | | | | |
| Задняя поясная кора | PCC | | | | |
| Предцентральная извилина (Перед срезкой поставьте булавку) | ПрКРГ | | | | |
| Постцентральная извилина (Перед срезкой поставьте булавку) | ПоКРГ | | | | |
| Затылочная извилина (включая область Бродмана 17 и 18) | ОС | | | | |
| миндалина | Эми | | | | |
| Базальные ганглии на уровне передней спайки с базальным ядром Мейнерта | BGMY | | | | |
| Талламус и субталламус | ТХ-СТХ | | | | |
| Тела молочных желез и гипоталамуса | МАМ+ГИПО | | | | |
| Базальные ядра форбран | ДФ | | | | |
| Передний гиппокамп | АХ | | | | |
| Задний гиппокамп (на коленчатом латеральном уровне), включая энторинальную кору и нижнюю височную кору | PH+EC+ITC | | | | |
| Кора мозжечка и ядро зубчатые | CRBDe | | | | |
| Mesencephalon (включая Substantia nigra) | МЕСС | | | | |
| Pons, включая Locus coeruleus (LC) | Понс | | | | |
| Medula oblongata Medula, включая DMV | МОби | | | | |
| Medula spinalis | МСпи | | | | |
| Верхняя часть спинного мозга | СК | | | | |
| Дура Мадре | дм | | | | |
