Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.
1. Уход за животными
- Используйте 3–4-месячных самцов мышей C57BL/6J. Обеспечьте подстилкой, материалами для гнезда, едой и водой ad libitum. Держите мышей при контролируемой температуре окружающей среды 20 - 22 °C с постоянными 12-часовыми световыми циклами / 12-часовыми темными циклами.
2. Подготовка к нанесению
- Прикрепите изготовленный на заказ металлический наконечник с силиконовым резиновым покрытием к электромагнитному стереотаксическому ударному устройству. Убедитесь, что плоское дно наконечника параллельно поверхности наконечника щупа (Рисунок 1A).
- Обезболите мышь 4% изофлураном с последующей поддерживающей анестезией 2,5% изофлураном. Проверьте анестезию с помощью расходомера. Контролируйте уровень анестезии до тех пор, пока животное не достигнет хирургического уровня анестезии, демонстрируя потерю рефлекса отмены педали.
- Положите мышь в положение лежа на грелку. Используйте воронкообразный носовой конус, чтобы держать мышь под анестезией. Полностью побрейте голову с помощью триммера. Используйте вазелинную офтальмологическую мазь на глазах мыши, чтобы предотвратить сухость во время анестезии.
3. Настройка параметров удара
ПРИМЕЧАНИЕ:} Ударная система включает в себя блок управления для установки параметров удара, привод для выполнения удара и цифровую стереотаксическую раму с 3-х движущимися осями.
- Предварительно установите скорость ударного устройства на 4 м/с и время пребывания на блоке управления до 240 мс.
4. Позиционирование центра удара
- Подложите под тело животного мягкую грелку, чтобы поддерживать температуру тела около 39 °C. Установите мышь в стереотаксическую рамку в положении лежа с тупыми ушными планками.
- Опустите ударный наконечник ближе к голове мыши, перемещая Z-драйвер. Отрегулируйте плоский ударный наконечник (диаметром 9 мм), переместив X- и Y-образные драйверы на полпути к целевым координатам над сагиттальным швом.
- Убедитесь, что один край ударного наконечника вертикально параллелен воображаемой горизонтальной линии, проведенной между двумя ушами (Figure, 1C). Центр воздействия соответствует центральному сагиттальному шву на полпути между межлобным и лямбдоидным швами (междувральный 9 мм до межушного 0 мм, латеральный 4,5 мм).
5. Настройка глубины удара
- Чтобы правильно установить глубину удара, используйте дополнительный наконечник щупа для замены ударного наконечника с изолированным силиконовым резиновым покрытием.
- Чтобы убедиться в отсутствии смещения центра удара после переключения наконечников, перед переключением наконечников установите каналы X и Y на цифровой стереотаксической панели управления в нулевое положение.
- Переместите наконечник щупа к центру зоны удара, вручную перемещая X- и Y-образные диски.
- Прикрепите контактный датчик к хвосту мыши.
- Перемещайте ударный элемент (Z-привод) вниз до тех пор, пока наконечник щупа не коснется поверхности места удара.
- Установите Z-канал на стереотаксической панели управления в нулевое положение.
- Переместите ударный наконечник обратно в зону удара, вручную отрегулировав X- и Y-драйверы (НЕ нулевые кнопки на цифровой стереотаксической панели управления) до тех пор, пока X- и Y-драйверы не станут нулевыми (там, где ранее был расположен ударный наконечник).
- Втяните привод, переместив переключатель втягивания на блоке управления. Вручную переместите импактор вниз (Z-драйвер) на 4 мм.
6. Удар
- Активируйте удар, щелкнув переключатель удара на блоке управления, и достигните глубины деформации 4 мм.
7. После удара
- Измерьте время от удара до первого вдоха мыши с помощью таймера.
- Снимите животное с инструмента и положите его на теплую подушку, чтобы поддерживать температуру тела. Не оставляйте животное без присмотра до тех пор, пока оно не придет в сознание, достаточное для поддержания лежачего положения на грудине.
- Дайте животному восстановиться, прежде чем возвращать его обратно в чистую клетку. Не возвращайте животное в компанию других животных до полного выздоровления.
- Наблюдайте и взвешивайте мышей ежедневно. Если у мышей проявляются признаки боли, внутрибрюшинно вводите им мелоксикам в дозе 1 - 2 мг/кг каждые 12 - 24 часа.
8. Повторяющиеся удары
- }Наносите мышам дополнительные травмы на 4, 7 и 10 день после первоначальной травмы (интервал между ударами 72 часа).
