Создание трехмерной сфероидальной модели инвазии опухолевых клеток

Аннотация

Источник: Guyon, J., et al. 3D-модель сфероида для глиобластомы. J. vis. exp. (2020)

В видео демонстрируется создание трехмерной сфероидальной модели инвазии опухолевых клеток. Сфероиды образуются из опухолевых клеток мозга человека и встраиваются в коллагеновую матрицу. Опухолевые клетки на периферии сфероида принимают инвазивный фенотип, выделяя протеазы для разрушения коллагена и продвигаясь к вторжению в окружающий матрикс.

Протокол

1. Генерация опухолевых сфероидов одинакового размера

ПРИМЕЧАНИЕ: Стволовые клетки культивируются в нейробазальной среде с добавлением добавки B27, гепарина, фактора роста фибробластов 2 (FGF-2), пенициллина и стрептомицина. Эти клетки спонтанно образуют сфероиды в культуре.

1. Промойте опухолевые клетки 5 мл фосфатно-солевого буфера (PBS) и инкубируйте клетки с 0,5-1 мл диссоциативного фермента в течение 5 минут при ....

Результаты

Рисунок 1: Сфероид глиобластомы P3 в анализах пролиферации, инвазии или миграции. (A) Пролиферативный анализ. Левая панель: Репрезентативные снимки с ДМСО в качестве контроля или с 20 мкМ ротенона (ингибитора комплекса дыхательной цепи I) в момент 0 или 72 ч. Правая панель: Количественная оценка площади сфероида представлена на изображениях пунктирными лин.......

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
96 хорошо круглодонная пластина	Falcon	08-772-212
Accutase	Gibco	A11105-01	Хранится при 4 °C, фермент диссоциации сфер
B27	Gibco	12587	Хранить при -20 °C, размораживать перед использованием
Основной фактор роста фибробластов	Peprotech	100-18B	Хранить при -20 °C, размораживать перед использованием
DPBS 10X	Pan Biotech	P04-53-500	Хранить при 4 °C
Метилцеллюлоза	Sigma	M0512	Разведен в NBM для получения 2% конечной концентрации
NBM	Gibco	21103-049	Хранится при 4 °C
Нейробазальная среда	Gibco	21103049	хранится при 4 °C
Пенициллин - стрептомицин	Gibco	15140-122	Хранится при 4 °C
Коллаген	I типаCorning	354236	хранить при температуре 4 °C