Характеристика сфероидов нейроэндокринных опухолей тонкой кишки с помощью иммунофлюоресценции

Аннотация

Источник: Ear, P. H., et. al. Установление и характеристика сфероидов нейроэндокринных опухолей тонкой кишки. J. Vis. Exp. (2019)

Это видео демонстрирует иммунофлуоресцентное окрашивание сфероидов нейроэндокринных опухолей тонкой кишки. Сфероиды фиксируются, проникают и блокируются, а затем инкубируются с первичными и вторичными антителами. Краситель добавляется к окрашиванию ядер перед монтажом и визуализацией их под флуоресцентным микроскопом.

Протокол

1. Сбор нейроэндокринных опухолей тонкой кишки (SBNET) и диссоциация

1. клетокПолучение резецированных образцов SBNET пациента после подтверждения опухолевой ткани из Центра хирургической патологии.
2. Нарежьте SBNET на кубики по 5 мм и храните их в 25 мл среды Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)/F12 в конической пробирке для транспортировки в лабораторию.
3. Перенесите опухоли в DMEM, содержащий 1% ф....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Anti-rabbit FITC	Jackson ImmunoResearch	11-095-152	Вторичное антитело-пара с зеленым флуорофором
Autostainer Link 48	Agilent Dako	Not Available	Автоматизированная система окрашивания
Контейнер для заморозки клеток	Thermo Scientific	5100-0001	Контейнер для заморозки клеток
CellSence	Olympus	Version 1.18	Компьютерное программное обеспечение для использования флуоресцентного микроскопа
Chromogranin A antibody	Abcam-45179	RB-9003-PO	Антитела для IF
Collagenase	Sigma	C0130	Фермент для переваривания опухолевой ткани
DMEM	Gibco	11965-092	Medium for tissue preparation
DMEM/F12	Gibco	11320-033	Среда для органоидных культур<
Sigma	DN25	Фермент для переваривания опухолевой ткани
FBS	Gibco	16000044	Реагент для культуральных сред
Флуоресцентный микроскоп	Olympus	CKX35	Микроскоп для съемки сфероидов SBENT SBENT<
Gibco	A2916801	Реагент для питательных сред
Insulin	Sigma	I0516	Реагент для питательных сред
Matrigel	Corning	356235	Матрица для встраивания и закрепления органоидов
Монтажная среда (VECTASHIELD)	Vector Laboratories	H-1200	Фиксатор для меченых клеток с ядерным окрашиванием
Никотинамид	Sigma	72340	Реагент для питательных сред
Paraformaldehyde<	15710	Реагент для фиксации клеток
PEN/STREP	Gibco	15140-122	Реагент для питательных сред
SSTR2 antibody	GeneScritp	A01591	Антитела для IF
Антитела к синаптофизину	Abcam	32127	Антитела для IF
TritonX	Mallinckrodt	3555 KBGE	Реагент для проникновения клеток
Y-2763 ROCK inhibitor	Adipogen	AG-CR1-3564-M005	Для улучшения жизнеспособности сфероида SBNET после замораживания

антителtd style='height:14.5pt;width:149pt;'>DNAsetd style='height:14.5pt;width:149pt;'>Glutaminetd style='width:153pt;'>Electron Microscopy Sciences