В этом видео показана процедура создания модели транспозиции невриномы большеберцовой кости (ТНТ) крысы. После обнажения большеберцового нерва в задней ноге крысы, находящейся под наркозом, пересеките нерв. Далее создайте подкожный туннель, проденьте через него оторванный нерв и зашите его на месте. При отсутствии мишени для реиннервации дезорганизованные аксональные выросты из разорванного нерва образуют невриному, которая вызывает нейропатическую боль, возбуждая ноцицепторы.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Создание модели транспозиции невриномы большеберцовой кости на крысе
1.1K просмотров
⸱
28 апреля 2025 г.
В этой статье
Аннотация
Протокол
Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Анестезия и подготовка
ПРИМЕЧАНИЕ: Это исследование было проведено на 15 самцах крыс Sprague Dawley в возрасте 12 недель.
- Обезболивайте животных путем индукции 5% изофлураном и поддерживайте анестезию 2%-3% изофлураном.
ПРИМЕЧАНИЕ: Поддерживающая терапия 2% изофлураном обычно приводит к достаточной анестезии и спонтанному дыханию без необходимости интубации трахеи или искусственной вентиляции легких. - Проверьте рефлексы животных, ущипнув ногу пинцетом. Прежде чем продолжить, убедитесь, что животное не реагирует. Выбрейте операционное поле от колена до лодыжки с помощью электробритвы и нанесите офтальмовизующую мазь на глаза, чтобы предотвратить сухость. Введите 0,5 мг/кг обезболивающего карпрофена подкожно в область живота.
- Положите крысу под наркозом на спину головой влево или вправо, а оперируемую ногу — рядом с хирургом. Экзоротируйте нижнюю заднюю конечность так, чтобы медиальная лодочка была обращена вверх. Поместите крысу под хирургический стереоскоп с 6-кратным увеличением.
- Продезинфицируйте выбритый участок тремя чередующимися раундами скраба на основе йода, а затем спиртом. Наденьте на ногу стерильную простыню с операционным отверстием, чтобы было видно только операционное поле. Убедитесь, что эти стерильные условия поддерживаются во время операции.
2. Хирургическое вмешательство
- Поместите небольшой ватный тампон ниже лодыжки, чтобы операционное поле было горизонтальным. Найдите колено и аккуратно сделайте продольный разрез на 1-2 см с помощью скальпеля над медиальной стороной задней лапы от середины голени до лодыжки. При необходимости раскройте кожу и подкожные отложения микроножницами до тех пор, пока не станут видны мышечные слои.
- Определите поверхностный сосудисто-нервный пучок как две или три белые и более толстые фиолетовые/красные линии, иногда с незначительными ответвлениями, которые могут свободно перемещаться по мышечным слоям. С помощью электрокоагуляции (см. Таблица материалов), коагулируйте любое активное кровотечение или сочащееся в операционном поле. Будьте осторожны, чтобы не повредить сосудисто-нервный пучок.
- Тупо рассеките, чтобы открыть фасцию между икроножными мышцами, прямо позади поверхностного сосудисто-нервного пучка 2,2. Между фасциями мышц находится большеберцовый нерв. Большеберцовый нерв примерно в три раза больше поверхностного нерва в сосудисто-нервном пучке. Используйте большеберцовую кость в качестве дополнительного ориентира (большеберцовый нерв лежит сразу за большеберцовой костью).
- Определите большеберцовый нерв и его раздвоение.
ПРИМЕЧАНИЕ: Бифуркация обычно видна более светлой линией в продольном направлении над нервом. - Осторожно рассеките большеберцовый нерв, освободив его от окружающих сосудистых пучков. Выполните рассечение, тупо двигая большеберцовый нерв и разрезая обнаженную ткань, которая демонстрирует некоторое растяжение при перемещении большеберцового нерва.
ПРИМЕЧАНИЕ: Если большеберцовый нерв прикреплен к пересекающимся венам после вскрытия, эти вены могут быть коагулированы, чтобы обнажить весь большеберцовый нерв. Будьте осторожны, чтобы не свернуть сам большеберцовый пучок. - Обнажите большеберцовый нерв проксимально до тех пор, пока он не исчезнет под пересекающимся мышечным слоем. В этот момент большеберцовый нерв, кажется, глубже погружается в заднюю лапу к колену. Обнажите большеберцовый нерв дистально до лодыжки.
ПРИМЕЧАНИЕ: Когда большеберцовый нерв обнажен более дистально, количество пересекающихся коллагеновых волокон (т.е. волокон, перпендикулярных направлению нервных волокон) увеличивается. Эти коллагеновые волокна необходимо разрезать, чтобы обеспечить достаточную длину для транспонирования большеберцового нерва.- Когда весь большеберцовый нерв обнажен, поместите мышечные слои обратно, чтобы избежать обезвоживания нерва. Если нерв обезвоживается (т.е. становится более жестким, тусклым и морщинистым) и покрытия мышечными слоями недостаточно, добавьте капли физраствора для его увлажнения.
- С помощью тупого микрохирургического инструмента, предпочтительно микроиглодержателя, рассеките претибиальную кожу подкожного мышечного слоя, чтобы создать подкожный туннель. Для этого нужно удерживать кожу вверх и проталкивать тупой кончик в ткань, параллельно коже. Убедитесь, что конец туннеля расположен точно или более сбоку, чтобы обеспечить легкий доступ к области для тестирования невриномы.
- Увеличьте дозу изофлурана до 5%. Вернитесь к большеберцовому нерву и обнажите его (т.е. вернитесь в место, описанное в пункте 2.6). Разрежьте большеберцовый нерв (т.е. обе подошвенные ветви) на самом дистальном уровне возле лодыжки. Уменьшите уровень изофлурана до нормального уровня в 2%-3%.
- Измените увеличение микроскопа на 10x или 16x. Определите эпиневрию большеберцового нерва проксимальнее разреза, сделанного на шаге 2.8, или, в случае более проксимальной бифуркации большеберцового нерва, определите эпиневрию как медиальной, так и латеральной подошвенной ветвей, проксимальнее разреза, на шаге 2.8.
ПРИМЕЧАНИЕ: Эпиневриум белее и тверже по сравнению с нервными волокнами внутри, которые более желтые и мягкие. - Аккуратно ставим 8-0 нейлоновый шов (см. Таблица материалов) через эпиневрий проксимального нервного конца, осторожно удерживая эпиневриум пинцетом и помещая иглу между нервом и эпиневрием с прикусом примерно 0,5 мм. Протяните шов насквозь и откусите иглой подкожно в конце подкожного тоннеля, сделанного в шаге 2.7. Завяжите узел, который будет транспонировать нерв латерально в подкожный туннель.
ПРИМЕЧАНИЕ: Если обе подошвенные ветви имеют общий эпиневрий, одного шва должно быть достаточно. Если обе подошвенные ветви имеют свой эпиневрий, то каждый эпиневрий следует фиксировать индивидуально. Избегайте наложения швов через кожу; Только фиксируйте его подкожно. - Наложить более толстый шов темного цвета (лучше синий или черный шов 4-0) вровень с зафиксированным нервным окончанием, не проникая в кожу. Убедитесь, что шов виден снаружи кожи. Проверьте, остается ли нерв на месте после движения лапы и мышц. Отрежьте концы швов с чуть более длинным концом шва на схеме 4-0, чем на схеме 8-0 шов.
- Измените увеличение микроскопа обратно на 6x. Закройте кожу внутриэпидермальными швами с помощью метода 8-0 Зашить и аккуратно очистить кожу 0,9% NaCl с помощью ватного тампона.
3. Послеоперационное лечение
- Поместите крысу в чистую клетку под бумажным полотенцем в удобном положении. Если в помещении холодно, подложите грелку под часть клетки (только под часть клетки, так как животное должно иметь возможность убежать от жары, когда это необходимо). Обеспечьте легкий доступ к еде и воде.
- Не оставляйте послеоперационную крысу без присмотра до тех пор, пока она не придет в сознание, достаточное для поддержания лежачего положения за грудиной. Крысу можно возвращать в компанию других животных, когда она полностью оправится от наркоза после операции. Обычно это происходит через 1 час, когда крыса демонстрирует свою нормальную походку и поведение.
- Через 24 ч и 48 ч после операции введите дозу 0,5 мг/кг карпрофена подкожно (область живота) для лечения послеоперационной боли.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии | ||
|---|---|---|---|---|---|
| Carprofen | Ватные палочки | Nobamed | 974255 | Электрокоаутерия | |
| Fine Science Tools | 18010-00 | ||||
| Ethanol 70% | Johnson & Johnson | 1854G | ВАЖНО: цвет должен быть синим или черным | ||
| Ethilon 8.0 | Johnson & Johnson | BV130-5 | < | ||
| Dechra Veterinary Products | B506 | ||||
| Mesh bottom cages | StoeltingCo | Fine Science Tools | 11251-35 | < | |
| Fine Science Tools | 12076-12 | < | |||
| Fine Science Tools | Fine Science Tools | 11254-20 | |||
| NaCl 0.9% | Trademed | H7 1000-FRE | |||
| Иглодержатель | Fine Science Tools< | < | |||
| Местный ветеринарный врач Pharmacy | n/a | Местная ветеринарная аптека производит офтальмологическую мазь | |||
| Scalpel | Fine Science Tools | 10003-12 | |||
| Scissors | Fine Science Tools< | < | |||
| Leica | A60 F | < | |||
| Evercare OneMed | Fine Science Tools | 10015-00 | |||
| Tweezers | Инструменты для тонкой науки | 11617-12 |
