Измерение слуховой реакции ствола мозга у мышей

Аннотация

Источник: Lee, D., et. al. Модифицированные экспериментальные условия для потери слуха, вызванной шумом, у мышей и оценки слуховой функции и повреждения наружных волосковых клеток. J. vis. exp. (2023)

В этом видео показано измерение слуховой реакции ствола мозга (ABR) у мыши. Электроды размещаются на голове, за ухом и рядом с хвостом мыши, находящейся под наркозом. Акустические стимулы доставляются с различной интенсивностью, а генерируемые электрические сигналы записываются в виде волн.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Оценка порога слуха на основе слухового ответа ствола мозга (ABR)

1. Используйте коммерческую систему тестирования ABR, специально разработанную для мелких животных.
2. Внутрибрюшинно вводите мышам смесь тилетамина и золазепама (40 мг/кг) и ксилазина (9,3 мг/кг) для общей анестезии.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Оценка ABR занимает ~2 часа. Обязательно обеспечьте тепловую поддержку с помощью грелки и нанесите глазную мазь, чтобы предотвратить сухость, пока мышь находится под анестезией.
3. Измерьте ABR у мыши под общим наркозом. Поместите субдермальные игольчатые электроды (12 мм) в макушке, за ушной раковиной левого уха и обратно возле хвоста, чтобы измерить порог слышимости.
4. Предъявляйте акустические стимулы с помощью динамика, расположенного на расстоянии 1 см от левого уха животного.
5. Используйте осциллограф для управления акустическими раздражителями. Выберите Синусоида для стимулов и 10 k для оконной шкалы. Поверните ручку Frequency , чтобы получить желаемую частоту акустических стимулов.
6. Отрегулируйте интенсивность стимула, повернув ручку амплитуды или AMLP на генераторе функций. Получите желаемую интенсивность стимула, повернув ручку AMLP на подходящее напряжение, рассчитанное по результатам калибровки.
7. Сбор данных измерений ABR по ряду интенсивностей стимула, от уровня звукового давления 10 дБ до уровня звукового давления 100 дБ с шагом 10 дБ.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Измерьте порог слышимости в звуконепроницаемом боксе. Минимальный уровень интенсивности стимула, который может привести к различимой волне V в собранном сигнале, был принят как порог ABR (Рисунок 1). После оценки ABR наблюдайте за животным до тех пор, пока оно не оправится от анестезии (~1 ч).

Результаты

Рисунок 1: Измерение слуха ABR. Репрезентативные результаты ABR на частоте 12 кГц, собранные на 13-е сутки (через 1 неделю после воздействия шума). Волна V при каждой интенсивности обозначается, если она различима.

Материалы