Индукция повышенного внутриглазного давления у модели крысы

Аннотация

Источник: Лани-Лузада, Р., et al., Полное прижигание лимбального сосудистого сплетения при хирургически индуцированной глаукоме у грызунов. J. Vis. Exp. (2022)

Это видео демонстрирует индукцию и мониторинг повышенного внутриглазного давления (ВГД) на модели крысы. Процесс включает в себя прижигание лимбальных кровеносных сосудов, что приводит к окклюзии сосудов и повышению ВГД. Затем крысе дают восстановиться, а ВГД регулярно контролируют как в экспериментальном, так и в контрольном глазах для сравнения.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

В настоящей работе использовались крысы Lister Hooded обоего пола в возрасте 2-3 месяцев и массой 180-320 г. Тем не менее, процедура может быть адаптирована к различным линиям крыс разного возрастного диапазона.

Хирургия глазной гипертензии и клиническое наблюдение

1. }Содержать животных в контролируемой температуре и 12-часовом цикле света/темноты (6 утра: свет включен / 6 вечера: свет выключен) со стандартным гранулированным гамма-облученным кормом (Nuvilab® CR-1, Quimtia S/A, Бразилия) и водой (тройной фильтр, с нетоксичным активированным углем) ad libitum.
2. Приготовьте бульонную смесь для обезболивающего коктейля, состоящую из трех частей 10% кетамина гидрохлорида и одной части 2% ксилазина гидрохлорида (разбавитель: стерильная вода).
3. Осторожно удерживайте животное, удерживая кожу за спину, и вызывайте анестезию путем внутрибрюшинного введения 1 μл/г массы тела смеси (кетамин: 75 мг/кг; ксилазин: 5 мг/кг). Проверьте правильность обезболивания примерно через 5 минут, выполнив реакцию на щипывание пальца ноги.
4. Местно обезболивают обе поверхности глаза, закапывая проксиметакаина гидрохлорид 0,5% глазные капли. Подождите 30-60 с и удалите остатки раствора с передней стороны глазного яблока, аккуратно коснувшись носовой или боковой бульбарной конъюнктивы небольшим стерильным ватным тампоном.
5. Измерьте исходное ВГД как экспериментальных, так и контралатеральных контрольных глаз, поместив животное в вентральное положение пролежня на столе таким образом, чтобы поверхность роговицы была легко доступна для кончика тонометра.
6. Используйте либо аппланацию, либо портативный тонометр с отскоком (Рисунок 1A). Расположите наконечник тонометра так, чтобы он слегка касался центральной зоны роговицы перпендикулярно. Получите и усредните 3–5 надежных средних значений, сгенерированных машиной. Каждое среднее значение автоматически рассчитывается устройством после шести успешных индивидуальных измерений.
   1. Зарядите отскочной тонометр щупом и нажмите кнопку измерения один раз, чтобы включить его, при этом расположив наконечник прибора вверх, чтобы избежать падения щупа. После его включения на дисплее будет отображаться 00, указывающее на то, что оборудование готово к измерениям.
   2. Расположите прибор кончиком зонда на расстоянии 1-4 мм от роговицы и проводите измерения, быстро и осторожно нажимая кнопку измерения, не перемещая оборудование. Каждое успешное измерение обозначается коротким звуковым сигналом, и после шести раз среднее значение отображается на экране устройства.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Несмотря на длительный опыт работы с аппланационным тонометром, для оптимизации всей процедуры авторы рекомендуют использовать отскочивший тонометр, который обеспечивает более легкое получение надежного измерения ВГД.
7. Поместите животное в небольшое боковое положение пролежня под стереомикроскопом и тщательно спланируйте операцию, осмотрев экспериментальный глаз при 40-кратном увеличении. Не забывайте поддерживать контралатеральный контроль глаза смазанными во время процедуры путем закапывания капли кармеллозы натрия или гиалуроната натрия.
8. С помощью изогнутых щипцов осторожно выдвиньте вперед экспериментальное глазное яблоко, чтобы обнажить сосудистую сеть, которая окружает лимб на 360°. Другой рукой аккуратно прижгите сосуды вокруг роговицы с помощью низкотемпературного офтальмологического прижигания (1 300 °F; Bovie Medical, США) (Рисунок 1B-E).
   ПРИМЕЧАНИЕ: Упомянутое прижигание имеет круглый кончик, который должен касаться лимбальной сосудистой сети в продольном направлении.
9. Будьте осторожны, чтобы не прижечь периферию роговицы, так как это может привести к послеоперационному помутнению роговицы, что исключает оценку функции сетчатки in vivo.
10. Наблюдайте появление небольших круговых следов прижигания на склеральном лимбе, облитерацию лимбальной сосудистой сети и расширение зрачка в прооперированном глазу, которые являются признаками успешной хирургической процедуры.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Поскольку лимбальная сосудистая сеть крыс и мышей анатомически схожа, а используемое прижигание имеет нежный маленький наконечник, этот протокол может работать и для мышиного глаза без какой-либо адаптации.
11. После операции проверьте ВГД на обоих глазах сразу после операции, как описано в шаге 1.5.
12. Нанесите каплю офтальмологического преднизолона ацетата (1,2 мг/мл) и удерживайте ее в контакте с передней поверхностью экспериментального глаза в течение примерно 40 с, затем замените ее офтальмологической мазью антибиотиков (окситетрациклина гидрохлорид 30 мг/г плюс полимиксин B 10 000 ЕД/г; или ципрофлоксацин 3,5 мг/г). Выполните внутримышечное введение трамадола гидрохлорида (однократная доза; 2 мг/кг) для предотвращения боли после процедуры.

Результаты

Рисунок 1: Термическое прижигание лимбального сосудистого сплетения и последствия для функции сетчатки in vivo. (A) Альтернативные методы измерения ВГД у крыс: отскочная тонометрия (высшая) и аппланационная тонометрия (низшая). (B-E) Хирургическое вмешательство; стрелолист: лимбальное сосудистое сплетение; стрелка: изогнутые щип...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Cautery Low Temp Fine Tip 10/bx	Bovie Medical Corporation	AA00	Low-temperature ophthalmic cautery
Cetamin	Syntec do Brasil Ltda	000200-3-000003	Кетамина гидрохлорид 10%
Ecofilm	Cristália Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda	MS-1.0298.0487	Кармеллоза натрия 0.5%
Hyabak	união Química Farmacêutica Nacional S/A	MS-8042140002	Гиалуронат натрия 0.15%
Icare Tonolab	Icare Finland Oy	TV02 (номер модели)	Рикошет портативный тонометр
Maxiflox	Cristália Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda	MS-1.0298.0489	Ciprofloxacin 3.5 мг/г
Ster MD	União Química Farmacêutica Nacional S/A	MS-1.0497.1287	Преднизолона ацетат 0.12%
Terolac	Cristália Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda	MS-1.0497.1286	Ketorolac trometamol 0.5%
Terramicina	Laboratórios Pfizer Ltda	MS-1.0216.0024	Окситетрациклина гидрохлорид 30 мг/г + полимиксин B 10,000 U/г
Tono-Pen XL	Reichert Technologies	230635	Цифровой аппланационный портативный тонометр
	Микроскоп Carl		Zeiss-Stereo для хирургии и диссекции сетчатки