Индукция ушиба спинного мозга у модели мыши с использованием коаксиальной платформы для травмы спинного мозга

Аннотация

Источник: Elzat, E. Y. Y., et al., Создание модели травмы спинного мозга при ушибе мыши на основе минимально инвазивной техники. J. Vis. Exp. (2022).

В этом видео демонстрируется метод индуцирования контузионной травмы на уровне Т9 спинного мозга на мышиной модели с использованием коаксиальной платформы для повреждения спинного мозга. На спинной мозг уровня Т9 падает груз, который создает ушиб, который немедленно вызывает обесцвечивание и отек тканей.

Протокол

Все процедуры, связанные с моделями животных, были рассмотрены местным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Локализация и ламинэктомия^9-го грудного позвонка (T9)

ПРИМЕЧАНИЕ: Самки мышей C57BL/6J в возрасте 9-10 недель были приобретены у компании Jinan Pengyue Experimental Animal Company (Цзинань, Китай).

1. Автоклавируйте набор хирургических инструментов для эксперимента и стерилизуйте операционный стол 75% спиртом перед операцией.
2. Введите бупренорфин для обезболивания (0,05-2,0 мг/кг, подкожно) за 30 минут до анестезии при травматических операциях. Затем обезболите мышь изофлураном (индукция: ~3-5%, поддерживающая: ~1,5-2%). Проверьте, полностью ли обезболивает животное рефлексами хвоста или щипки пальцев ног. После того, как анестезия начнет действовать, положите мышь в положение лежа в определенной части операционного стола и покройте роговицу офтальмологической мазью (нанесите офтальмологическую мазь на роговицу, чтобы защитить глаза от высыхания во время операции).
   1. Сбрейте волосы от хвостового до рострального с помощью электробритвы над грудопоясничным отделом позвоночника. Простерилизуйте кожу несколько раз круговыми движениями йодофором в течение 30 с, а затем добавьте 75% спирт. Наложите стерильную хирургическую простыню и сделайте скальпелем и лезвием продольный разрез примерно 1,5 см на коже примерно от^6-го грудного позвонка (Т6) до^13-го грудного позвонка (Т13).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Пальпируйте вдоль реберного края до средней линии, где находится межостистое пространство^12-го грудного позвонка (T12) - T13. Сделайте разрез на 1,5 см до ростраль, причем разрез должен быть примерно вровень с позвонками Т6-Т13.
3. Исследуйте^13-е ребро с одной стороны из костной части под операционным микроскопом. Исследуйте остистый отросток по средней линии, слегка коснувшись области реберно-вертебрального угла, а затем по направлению к ростральному, чтобы найти межостистое пространство Т12-Т13. Исследуйте межостистое пространство Т9 -^10-го грудного позвонка (Т10) от пространства Т12-Т13 до ростральной стороны. (Рисунок 1А, 2А)
4. Рассеките параспинальную мышцу вдоль остистого отростка T9 до передних и задних фасеточных суставов с обеих сторон с помощью микроножниц (Рисунок 2B). Втяните параспинальные мышцы микроретракторами и очистите микроножницами мягкие ткани на пластинке и в межостистом пространстве^8-го грудного позвонка (Т8) - Т9 и Т9-Т10.
5. Выполните ламинэктомию T9, зажмите остистый отросток T9 микрохирургическими щипцами, слегка приподнимите его, вставьте микроножницы параллельно вдоль правой дорсолатеральной стороны пластинки, избегая повреждения спинного мозга, и отрежьте пластинку микроножницами. Повторите с левой стороны, и спинной мозг может быть оголен (рис. 1B, 2C).
6. Перед фиксацией позвонка ослабьте универсальный рычаг и медленно зажмите^9-10-й фасеточные суставы с обеих сторон позвонка с помощью микромоскитных щипцов стабилизатора позвонка. Затяните винты на микрощипцах от комаров, и таким образом позвонок стабилизируется. Отрегулируйте спинной мозг в горизонтальной плоскости, затяните универсальную руку и зафиксируйте позвонок (Рисунок 2D).

2. T9 contrusion injury

1. Как только спинной мозг уровня T9 обнажен и позвонок зафиксирован, нацельтесь на спинной мозг кончиком внутри рукава под операционным микроскопом (Рисунок 2E).
2. Проверьте, параллельна ли поверхность кончика спинному мозгу со стороны задней и боковой сторон спинного мозга, так как под микроскопом легко наблюдать взаимосвязь между спинным мозгом и кончиком, а операционный стол можно легко поворачивать.
3. Проверьте, параллельна ли поверхность кончика двусторонним границам сохраненной пластинки, прежде чем кончик войдет в контакт со спинным мозгом после ламинэктомии, поскольку это естественная плоскость отсчета, параллельная спинному мозгу.
4. После определения межостистого пространства T12-T13 опустите рукав до тех пор, пока конец импактора не будет соответствовать отметке на смотровом окне и не будет достигнута указанная высота 22 мм. Вытяните штифт, чтобы освободить груз (1,3 г, 2,0 г или 2,7 г в зависимости от группы, причем каждая группа включает 3 мыши, и каждая группа имеет одну мышь для каждой временной точки).
   ПРИМЕЧАНИЕ: Спинной мозг должен быть параллелен земле и перпендикулярен кончику; перемещайте операционный стол, чтобы обеспечить микроскопическое поле зрения, так как стол очень компактный.
5. Удалите импактор после ушиба и понаблюдайте за степенью повреждения спинного мозга (ТСМ) под операционным микроскопом. В группе с легкой степенью тяжести можно заметить изменение светло-красного цвета, в то время как в группе с умеренной степенью тяжести место повреждения приобретает темно-красный цвет через 3-4 с, и, возможно, может наблюдаться возвышение. В тяжелой группе темно-красные проявления могут проявиться сразу, и проявляется явное возвышение твердой мозговой оболочки, но твердая мозговая оболочка все еще находится в постоянной форме (рисунок 2F).

Результаты

Рисунок 1. Визуализационный график метода локализации реберных позвонков T13. (A) Ребро 13^th и T13 являются относительно постоянными анатомическими структурами. Реберно-вертебральный угол T13 может быть легко обнаружен под микроскопом, с помощью которого оператор может прощупать остистый отросток и найти межостистое ...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Этанол	Реагент Фую	64-17-5	}
Флуоресцентный микроскоп	KEYENCE	BZ-X800
Мыши	Jinan Pengyue Experimental AnimalCompany	C57BL/6J
Аппарат для микрохирургии	Shandong ULT Biotechnology Co., Ltd	Все хирургические инструменты изготовлены по индивидуальному заказу	Офтальмологические ножницы, микромоскитные щипцы, микрохирургические щипцы, микроножницы
Лабораторная ингаляционная анестезиологическая станция RWD	RWD Life Science Co., Ltd	R550
}Система микрокомпьютерной томографии для мелких животных in vivo	PerkinElmer	}Quantum GX2
}Травма спинного мозга коаксиальная платформа	Shandong ULT Biotechnology Co., Ltd	Custom-made (стандарт Feng)	(https://shop43957633.m.youzan.com/wscgoods/detail/367x5ovgn69q18g?banner_id=f.81386274~goods.7~1~ b0yRFKOq&alg_id=0&slg=tagGood List-default%2COpBottom%2Cuuid %2CabTraceId&components_style_ layout=1&reft=1659409105184&sp m=g.930111970_f.81386274&alias =367x5ovgn69q18g&from_uuid=136 2cc46-ffe0-6886-2c65-01903dbacbb a&sf=qq_sm&is_share=1&shopAuto Enter=1&share_cmpt=native_ wechat&is_silence_auth=1)

{{TAG_ 39}}