Это видео демонстрирует обнаружение мРНК в холинергических аксонах в фиксированных срезах гиппокампа мыши с использованием флуоресцентной гибридизации in situ и окрашивания антителами. Флуоресцентная микроскопия выявляет пространственную локализацию меченых зондом мРНК и холинацетилтрансферазы в холинергических нейронах.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Иммуноокрашивание нейронов в срезах мозга мышей после флуоресцентной гибридизации in situ
881 просмотров
⸱
28 апреля 2025 г.
В этой статье
Аннотация
Протокол
Все процедуры, связанные с образцами животных, были рассмотрены и одобрены соответствующим комитетом по этической экспертизе животных.
- FISH с последующим иммуногистохимическим анализом с использованием индуцированного нагреванием антигена/РНК-демаскирования
- }
- Нагрейте гибридизационную печь до 40 °C и поместите противень с дистиллиров....
- }
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Пользовательский зонд, нацеленный на остатки 20-1381 мРНК мыши Atf4 (NM_009716) | Advanced Cell Diagnostics | - | Probe |
| Пользовательский зонд, нацеленный на остатки 15-1256 мРНК ATF4 человека (NM_001675.2) | Advanced Cell Diagnostics | - | Probe |
| Negative control probe-DapB | Advanced Cell Diagnostics | 310043 | Probe |
| Positive control probe-mouse Polr2A (опционально) | Advanced Cell Diagnostics | 312471 | Probe |
| Goat polyclonal anti-ChAT антитела | Millipore | AB144P | |
| Монтажный носитель ProLong Gold с DAPI | Life Technologies | P36935 | |
| RNAscope Fluorescent Multiplex Reagent Kit (для обнаружения флуоресценции) | Advanced Cell Diagnostics | 320850 | Набор для гибридизации in situ |
