Создание модели мыши с травмой спинного мозга

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Подготовка хирургических и нехирургических инструментов

1. Стерилизуйте хирургические и нехирургические инструменты в автоклаве.
2. Очистите хирургический операционный стол 70% этанолом и нагрейте грелку до 37 °C.
3. Положите грелку на операционный стол и накройте его стерильными хирургическими простынями.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Во всех процедурах выживания здесь используется техника "Без прикосновения" для поддержания стерильности.

2. Подготовка животных и выполнение спинальной ламинэктомии T9-T10

1. Приобретение взрослых (Balb/c) 10-недельных самцов мышей. Вызывайте анестезию у каждого животного с помощью ингалятора, начиная с 5% изофлурана, а затем уменьшая до 2-3% для поддержания седативного эффекта в течение оставшейся части процедур.
2. Подтвердите полную анестезию, не вызвав ответа на стимуляцию ноцицепции, вызванную ущипыванием хвоста/лапы.
3. Сбрейте волосы над тыльной стороной (от головы до хвоста) с помощью электрической машинки для стрижки, а затем нанесите крем для депиляции (3 минуты), чтобы удалить оставшиеся волосы. Наконец, промойте спинку проточной водой/влажным скрабом и верните животных в клетки.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Это необходимо, чтобы избежать дополнительного раздражения кожи и химического загрязнения во время повреждения кожи
4. На следующий день нанесите офтальмологическую мазь на роговицу, чтобы защитить глаза от высыхания во время хирургической процедуры. Затем протрите кожу 3 альтернативными препаратами бетадинового скраба и 70% этанола.
5. Скальпелем выполнить разрез кожи (~1,0-1,5 см) по средней линии на спине на уровне позвонков Т8-Т12.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Уровень позвонков определяется путем обратного подсчета позвонка от T13 с использованием расположения плавающих ребер, которые соответствуют позвонку T13.
6. Очистите подкожную жировую клетчатку, чтобы получить доступ к параспинальным мышцам, а затем медленно рассеките их, чтобы обнажить остистые отростки и пластинки с обеих сторон.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Выполняйте эту процедуру очень осторожно, чтобы избежать чрезмерного кровотечения или любой травмы спинного мозга на этом этапе.
7. Выполните ламинэктомию для обнажения спинного мозга (позвонков T9-T10) путем мягкого отшелушивания спинномозговой пластинки с помощью микрорассекающих щипцов.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Выполняйте ламинэктомию так, чтобы избыток спинного мозга был обнажен, чтобы облегчить создание травмы. В контрольной группе выполняется только ламинэктомия.

3. Выполнение T9-T10 Полная травма спинного мозга (ТСМ)

1. Используя щипцы, зафиксируйте позвоночный столб в точке T8 и подтяните, чтобы увеличить искривление позвоночника.
2. С помощью тонких ножниц разрежьте спинной мозг между позвонками Т9 и Т10 до дна позвоночного канала, чтобы обеспечить полную транссекцию.
3. После наблюдения за полным рассечением под хирургическим микроскопом наложите кусочек подкожного жира на место ламинэктомии, чтобы обеспечить дополнительную защиту спинного мозга перед закрытием места операции.
4. Наконец, закройте рану и зашите паравертебральные мышцы и поверхностную фасцию с помощью непрерывных швов, а затем закройте кожу с помощью шовных зажимов.
5. После ТСМ наблюдайте за опорожнением кишечника на следующий день; Тем не менее, управляйте мочевым пузырем с помощью ручной опорожнения мочевого пузыря.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Шкала Basso Mouse Scale (BMS) может быть использована для мониторинга прогресса функционального восстановления задних конечностей после ТСМ на 2-й день, а затем еженедельно.