$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Подготовка хирургических и нехирургических инструментов
- Стерилизуйте хирургические и нехирургические инструменты в автоклаве.
- Очистите хирургический операционный стол 70% этанолом и нагрейте грелку до 37 °C.
- Положите грелку на операционный стол и накройте его стерильными хирургическими простынями.
ПРИМЕЧАНИЕ: Во всех процедурах выживания здесь используется техника "Без прикосновения" для поддержания стерильности.
2. Подготовка животных и выполнение спинальной ламинэктомии T9-T10
- Приобретение взрослых (Balb/c) 10-недельных самцов мышей. Вызывайте анестезию у каждого животного с помощью ингалятора, начиная с 5% изофлурана, а затем уменьшая до 2-3% для поддержания седативного эффекта в течение оставшейся части процедур.
- Подтвердите полную анестезию, не вызвав ответа на стимуляцию ноцицепции, вызванную ущипыванием хвоста/лапы.
- Сбрейте волосы над тыльной стороной (от головы до хвоста) с помощью электрической машинки для стрижки, а затем нанесите крем для депиляции (3 минуты), чтобы удалить оставшиеся волосы. Наконец, промойте спинку проточной водой/влажным скрабом и верните животных в клетки.
ПРИМЕЧАНИЕ: Это необходимо, чтобы избежать дополнительного раздражения кожи и химического загрязнения во время повреждения кожи - На следующий день нанесите офтальмологическую мазь на роговицу, чтобы защитить глаза от высыхания во время хирургической процедуры. Затем протрите кожу 3 альтернативными препаратами бетадинового скраба и 70% этанола.
- Скальпелем выполнить разрез кожи (~1,0-1,5 см) по средней линии на спине на уровне позвонков Т8-Т12.
ПРИМЕЧАНИЕ: Уровень позвонков определяется путем обратного подсчета позвонка от T13 с использованием расположения плавающих ребер, которые соответствуют позвонку T13. - Очистите подкожную жировую клетчатку, чтобы получить доступ к параспинальным мышцам, а затем медленно рассеките их, чтобы обнажить остистые отростки и пластинки с обеих сторон.
ПРИМЕЧАНИЕ: Выполняйте эту процедуру очень осторожно, чтобы избежать чрезмерного кровотечения или любой травмы спинного мозга на этом этапе. - Выполните ламинэктомию для обнажения спинного мозга (позвонков T9-T10) путем мягкого отшелушивания спинномозговой пластинки с помощью микрорассекающих щипцов.
ПРИМЕЧАНИЕ: Выполняйте ламинэктомию так, чтобы избыток спинного мозга был обнажен, чтобы облегчить создание травмы. В контрольной группе выполняется только ламинэктомия.
3. Выполнение T9-T10 Полная травма спинного мозга (ТСМ)
- Используя щипцы, зафиксируйте позвоночный столб в точке T8 и подтяните, чтобы увеличить искривление позвоночника.
- С помощью тонких ножниц разрежьте спинной мозг между позвонками Т9 и Т10 до дна позвоночного канала, чтобы обеспечить полную транссекцию.
- После наблюдения за полным рассечением под хирургическим микроскопом наложите кусочек подкожного жира на место ламинэктомии, чтобы обеспечить дополнительную защиту спинного мозга перед закрытием места операции.
- Наконец, закройте рану и зашите паравертебральные мышцы и поверхностную фасцию с помощью непрерывных швов, а затем закройте кожу с помощью шовных зажимов.
- После ТСМ наблюдайте за опорожнением кишечника на следующий день; Тем не менее, управляйте мочевым пузырем с помощью ручной опорожнения мочевого пузыря.
ПРИМЕЧАНИЕ: Шкала Basso Mouse Scale (BMS) может быть использована для мониторинга прогресса функционального восстановления задних конечностей после ТСМ на 2-й день, а затем еженедельно.