Метод очистки гидрофобной ткани для образца ткани мозга крысы

Аннотация

Источник: Кирхнер, К.Н., et al., Метод очистки гидрофобной ткани мозга крысы. J. Vis. Exp. (2020).

В этом видео демонстрируется метод гидрофобной очистки ткани мозга крысы. Образец последовательно обезвоживают в метаноле, обрабатывают смесью дихлорметана и метанола для растворения липидов и пигментов и переносят на дибензиловый эфир для полного очищения тканей, что позволяет получить детальную визуализацию без тонких срезов.

Протокол

Все процедуры, связанные с образцами животных, были рассмотрены и одобрены соответствующим комитетом по этической экспертизе животных.

1. Очищение тканей

1. Инкубируйте образец в 20% растворе метанола / 80% деионизированной воды в течение 1 часа при комнатной температуре (RT).
2. Инкубируйте образец в 40% растворе метанола/60% деионизированной воды в течение 1 ч при RT.
3. Инкубируйте образец в растворе 60% метанола/40% деионизированной воды в течение 1 ч при RT.
4. Инкубируйте образец в растворе 80% метанола/20% деионизированной воды в течение 1 ч при RT.
5. Инкубируйте образец в 100% метаноле в течение 1 часа при RT.
6. Инкубировать в свежем 100% метаноле в течение ночи при RT.
7. Инкубировать в 66% дихлорметане (DCM)/33% метаноле в течение 3 часов, с встряхиванием, при RT.
8. Инкубировать в дибензиловом эфире (DBE) без встряхивания. Оставьте образец в DBE до прозрачности и храните в DBE до получения изображения.

Материалы