Живая визуализация глаза куколки дрозофилы с помощью флуоресцентной микроскопии

Аннотация

Источник: Hellerman, M. B. , и др. Живая визуализация }Drosophila}. J. Vis. Exp. (2015)

{{TAG_ 28}}Видео демонстрирует технику визуализации в реальном времени для изучения рисунка глаз у куколки Drosophila melanogaster. Маркеры, помеченные зеленым флуоресцентным белком (GFP), позволяют визуализировать клеточную организацию и дифференцировку во время формирования развивающейся структуры глаза.

Протокол

1. Флуоресцентная визуализация

Drosophila NOTE: NOTE:<span style='font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;font-weight:400;text-decoration:none; vertical-align:baseline; white-space:pre-wrap;'> Визуализация дольше 4 часов может замедлить или затормозить морфогенез глаза.
3. Используйте соответствующее программное обеспечение для деконволюции, чтобы уменьшить фон и повысить контрастность изображений серийных разделов. Для каждого файла z-stack выполните следующие действия в программном обеспечении Leica Application Suite Advanced Fluorescence (LAS AF): Перейдите на панель «Инструменты», выберите «3D Deconvolution» и нажмите «Применить».
4. <span style='font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;text-decoration:none;vertical-align:baseline; white-space:pre-wrap;'>ПРИМЕЧАНИЕ: Алгоритм MP может не сгенерировать равномерно сфокусированное изображение для ткани, которая была передискретизирована.

2. Обработка изображений

ПРИМЕЧАНИЕ: Живая Drosophila ткань будет смещаться и расти в процессе визуализации. Следовательно, центры изображений, собранных в последовательных временных точках, могут не соответствовать одной и той же точке в <span style='font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-variant:normal;font-weight:400;text-decoration:none; vertical-align:baseline; white-space:pre-wrap;'> Drosophila
1. На вкладке "Файл" главного меню откройте "Скрипты" и выберите "Загрузить файлы в стопку".
2. ПРИМЕЧАНИЕ: Если выбран этот вариант, программное обеспечение может использовать алгоритм выравнивания, который искажает данные изображения.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
GMR-GAL4; UAS-a-cat:GFP, ubi-DE-Cadherin:GFP ; + / SM5-TM6b
UAS-dcr-2; UAS-a-cat:GFP, ubi-DE-Cadherin:GFP; + / SM5-TM6b
25 x 75 x 1 мм стеклянное предметное стекло для микроскопа	Fisher Scientific	12-550-413
22 x 40 мм стеклянное покровное стекло	VWR	48393-172
щипцы	Fine Science Tools	91150-20
ватман 3 мм хроматографическая бумага	Fisher Scientific	05-713-336
вазелин	Fisher Scientific	19-086-291
30 мл шприц	Fisher Scientific	S7510-30
Adobe Photoshop CS5	Adobe
Leica TCS SP5 DM микроскоп	Leica Microsystems
LAS AF Version 2.6.0.7266 программное обеспечение для микроскопа	Leica Microsystems