Использование спектральной рефлектометрии для определения диаметров миелинизированных аксонов в неподвижном срезе мозга мыши

Аннотация

Источник: Квон, Дж., {{}}et и др., спектральная рефлектометрическая микроскопия миелинизированных аксонов in situ. J. vis. exp. (2018)
}

}Это видео демонстрирует использование спектральной рефлектометрии с гиперспектральным конфокальным микроскопом для анализа интерференционных картин и определения диаметров миелинизированных аксонов в фиксированных срезах ткани мозга.

Протокол

Все процедуры, связанные с образцами животных, были рассмотрены и одобрены соответствующей экспертизой по этике животных Комитет.

1. Calibration

1. Включите микроскоп не менее чем за 1 час до получения изображения, чтобы обеспечить термостабилизацию лазерного источника (см. Таблицу материалов). Затем включите программное обеспечение для спектрального сканирования (см. Таблицу материалов) и нажмите кнопку «Получить» в верхней части графического пользовательского интерфейса (<span style='font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;text-decoration:none;vertical-align:baseline; white-space:pre-wrap;'>Рисунок 1a).
2. Рисунок 1a).
3. Figure 1b).
4. Рисунок 1c).
   Note: Акустооптический светоделитель) и кнопки Live Scan. Переключите оптический путь, проверив отражение в конфигурации AOBS (Figure 1d).
5. e.g., slide стекло).
6. Note:i.e.2. SpeRe (Spectral reflectometry) Получение изображений
   1. Поместите установленную салфетку на предметный столик микроскопа. Чтобы примерно выровнять ткань по фокальной плоскости линзы объектива, используйте режим широкоугольной флуоресценции через окуляр.
   2. Live ScanMultistacked TIF формат.
      Note: Экспериментатор может сделать паузу на этом этапе.

   3. Обработка и анализ изображений

   Image<span style='font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal; font-variant:normal;font-weight:400;text-decoration:none; vertical-align:baseline; white-space:pre-wrap;'> → Stacks → Plot Z-axis profile в меню ImageJ.
   1. Image → Stacks → Plot Z-axis profile в меню ImageJ.
   2. Copy and Paste.
      Note:

Результаты

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Объектив Апохромат 40×, NA 1.1	Leica Microsystems	15506357	Тип погружения в воду.
Фторомиелин зеленый	Thermo Fisher	F34651	}
Микроскоп Leica SP8 TCS	Leica Microsystems	SP8
Программное обеспечение для обработки изображений	Leica Microsystems	LAS-X
Matlab	MathWorks
Mirror	Thorlabs	PF10-03-P01	Покрыт защищенным серебром.
Накладка	Термофишер	3306	Толщина: #1 (от 0,13 до 0,17 мм).
Слайд-стекло	Muto Pure Chemicals	5116-20F	Толщина: ~1 мм.
Суперклей	Henkel	Loctite 406	Используйте дозирующее оборудование, чтобы избежать контакта с кожей или глазами.
Лазер белого света	NKT photonics	EXB-6	EXB-6 был снят с производства и заменен на EXU-6.

{{{TAG_ 48}}