Все процедуры, связанные с образцами животных, были рассмотрены и одобрены соответствующим комитетом по этике животных.
1. визуализация корковых модулей с использованием окрашивания цитохромоксидазой
ПРИМЕЧАНИЕ: Были разработаны различные протоколы окрашивания для гистохимического обнаружения активности цитохромоксидазы. В этом протоколе используется сульфат никель-аммония (NiAS), что приводит к более высокому контрасту и более четкой коррекции модулей в окрашенных областях коры головного мозга.
- Приготовьте раствор для окрашивания цитохромоксидазой. На 10 мл раствора добавьте 10 мл буфера 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинетансульфоновой кислоты (0,1 М, pH 7,4), 400 мг сахарозы, 12,5 мг NiAS, 2 мг цитохрома C и 6 мг диаминобензидина (DAB).
ВНИМАНИЕ: DAB и NiAS являются канцерогенными.
<span style='font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;text-decoration:none;vertical-align:baseline; white-space:pre-wrap;'>ПРИМЕЧАНИЕ: Добавьте DAB непосредственно перед инкубацией секций. - <span style='font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;text-decoration:none;vertical-align:baseline; white-space:pre-wrap;'>ПРИМЕЧАНИЕ: Обратите внимание на скорость окрашивания. Если видимой реакции нет, переходят на инкубацию при 37 °C. В зависимости от степени фиксации окрашивание может наблюдаться через 10 мин или через несколько часов.
- Промойте слайды в 60% этаноле в течение 1 мин. Промойте слайды в 80% этаноле в течение 1 мин. Промойте слайды в 96% этаноле в течение 2 мин. Промойте слайды в 100% этаноле в течение 3 мин. Промойте слайды в изопропаноле в течение 5 мин. Промойте слайды в ксилоле в течение 5 мин.
Critical: