Измерение экспрессии белка в мозге грызунов с помощью флуоресценции в ближнем инфракрасном диапазоне и сканирования с высоким разрешением

Аннотация

Источник: Kimmelmann-Shultz, Б., et. al. использование ближней инфракрасной флуоресценции и сканирования высокого разрешения для измерения экспрессии белка в мозге грызунов. J. Vis. Exp. (2019)

Это видео демонстрирует метод флуоресценции ближнего инфракрасного диапазона и сканирования с высоким разрешением для измерения экспрессии белка в мозге грызуна.

Протокол

Все процедуры, связанные с образцами животных, были рассмотрены и одобрены соответствующим комитетом по этике животных.

1. Imaging

2. Слайды изображений с использованием наивысшей настройки качества со смещением 0 нм и разрешением 21 мкм. Сканирование обычно занимает 13−19 часов, в зависимости от используемого сканирующего оборудования.

3. Импортируйте изображения в программное обеспечение для анализа изображений (например, Image Studio) для просмотра и маркировки на предмет полуколичественного белка анализ.

2. Анализ экспрессии белка

1. Откройте программу для анализа изображений и выберите Work Area в которую помещается изображение был отсканирован.

2. Откройте отсканированное изображение в программном обеспечении для анализа изображений, чтобы просмотреть скан, а также настроить, какие длины волн будут просматриваться. в качестве контраста, яркости и увеличения, отображаемых без изменения исходного изображения или общего количественного излучения.

3. Определите ключевые области для количественной оценки и выберите Analysis tab вдоль верхней части страницы, затем выберите Draw Rectangle (или Draw Ellipse/ Draw Freehand) чтобы нарисовать прямоугольник над областью, которая будет количественно определена.

4. Чтобы просмотреть размер прямоугольника, выберите Shapes вдоль нижнего левого угла экрана, затем выберите Columns внизу справа. Добавьте Height<span style='font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;font-weight:400;text-decoration:none; vertical-align:baseline; white-space:pre-wrap;'> и Width столбцы для определения размера формы.

ПРИМЕЧАНИЕ: Важно контролировать размер формы при сравнении количественной оценки. Рекомендуется использовать идентичные формы, расположенные в желаемом месте количественной оценки, чтобы получить точную выборку выбросов для этого региона.

5. Затем назовите форму и повторите. После того, как все регионы отобраны, данные, доступные из columns tab может быть агрегированы и проанализированы.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Предметные стекла для микроскопа	Fischer Scientific	12-549-6	}
Сканер Licor Odyssey	Licor Biotechnology Inc.
Image Studio	Licor Biotechnology Inc.		{{TAG_ 37}}