Биолюминесцентная визуализация на мышиной модели EAE

Аннотация

<

p style='line-height:1.2;margin-bottom:0pt;margin-top:0pt;' dir='ltr'>Источник: Schmitz, К., et al., Биолюминесценция и ближняя инфракрасная визуализация неврита зрительного нерва и воспаления мозга в модели рассеянного склероза у мышей по модели EAE. J. Vis. Exp. (2017).

В этом видео демонстрируется метод визуализации и мониторинга экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита или EAE-индуцированного воспаления зрительного нерва с использованием Биолюминесцентная визуализация. Он включает в себя позиционирование мыши, впрыск реагента и получение последовательных изображений для мониторинга изменений биолюминесценции с течением времени.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Биолюминесцентная визуализация неврита зрительного нерва и воспаления головного мозга

1. Настройка системы визуализации
   1. Выполняйте визуализацию in vivo с помощью любого оборудования, позволяющего анализировать биолюминесценцию и сигналы ближнего инфракрасного диапазона.
   2. Держите мышей под 2-2,5% изофлурановой анестезией во время всех процедур визуализации.
   3. Расположите одну или две мыши рядом друг с другом в аппарате, используя среднюю подачу газа. Расположите верхний корешок в центре.
   4. Чтобы оценить эффекты лекарств, сравните пары мышей, использующих двух мышей одновременно, по одной в группе. Это важно для биолюминесцентной визуализации.
   5. Закройте место иммунизации черной тканью и сделайте фотографию и исходное изображение, чтобы оценить правильное положение мыши/мышей. Для всех изображений используйте B-фокус на расстоянии 6,5 см от камеры.
2. Инъекция и визуализация биолюминесцентного датчика воспаления
   1. Используйте {{}} in vivo настройки системы визуализации: Epi-BLI, Em filter открытый, Ex filter block, fstop 1, binning 8, focus B = 6,5 см, ad exposure 120 s; Сделайте исходное изображение.
   2. Введите 100 μL в/ч готового к применению хемилюминесцентного реагента (40 мг/мл). Хорошо перемешайте перед наполнением шприца.
   3. Сделайте биолюминесцентные снимки через 5, 10 и 15 минут после инъекции. Временной ход биолюминесцентного пика у разных животных отличается.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Пик произойдет через 5 - 10 минут после инъекции; Снижение на 15 минуте указывает на то, что дополнительные изображения не требуются. Используйте мышиные пары контрольной и лечебной групп, чтобы устранить незначительные смещения из-за разного временного хода.
   4. Заполните описания, относящиеся к эксперименту. Наблюдайте за автоматическим всплывающим окном; Он включает в себя такую информацию, как штамм мыши, пол, временная точка, время введения зонда, группа, и и т.д. . Сохраните все файлы в одной папке; У них будут метки времени и все описания.

Материалы