Method Article

Двухфотонная микроскопия для визуализации морфологии нейронов у детеныша мыши

May 29th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Mizuno, H., et al. In Vivo<span style='font-family:"Arial",sans-serif;font-size:12.0pt;' lang='EN-US'> двухфотонная визуализация корковых нейронов у новорожденных мышей. J. Vis. Эксп. (2018)

Это видео демонстрирует двухфотонную микроскопию, используемую для визуализации нейронов в мозге трансгенного щенка мыши, находящегося под наркозом. Двухфотонный лазер позволяет получать более глубокие изображения с высоким пространственным разрешением и минимальным рассеянием света, что позволяет детально фиксировать морфологию нейронов, включая дендритные проекции.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

<

p style='line-height:1.2;margin-bottom:0pt;margin-top:0pt;' dir='ltr'>Все процедуры, связанные с моделями животных, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным учреждением JoVE
<

p style='line-height:1.2;margin-bottom:0pt;margin-top:0pt;' dir='ltr'>1. Cranial Window Preparation

  1. Обезболите щенка изофлураном (1,0% - 2,0%) и проверьте уровень анестезии с помощью теста на щипковый хвост.
  2. Рисунок 1C2, и 2 ммоль/л MgSO4; pH 7.4; 300 mOsm/L; комнатная температура) для остановки кровотечения. При вскрытии черепа нанесите буфер коры головного мозга, чтобы поверхность мозга оставалась влажной.
  3. NOTE: Figure 1D<span style='font-family:Roboto,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal; font-weight:400;text-decoration:none; vertical-align:baseline; white-space:pre-wrap; '> и1E).
  4. Figure 1F).
  5. Figure 1GFigure 1H).
  6. 2. Двухфотонная визуализация

      NOTE:<span style='font-family:Roboto,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;font-weight:400;text-decoration:none; vertical-align:baseline; white-space:pre-wrap;'> Мощность лазера должна уменьшаться по мере продвижения вверх z-позиции.
    1. Рисунок 2A и 2B). Отрегулируйте головку так, чтобы покровное стекло было параллельно линзе объектива с помощью столика гониометра (Figure 2BNOTEРисунок 2B и <span style='font-family:Roboto,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;text-decoration:none; vertical-align:baseline; white-space:pre-wrap;'>2C).
    2. Figure 2D2ENOTE:

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
figure-results-1

Рисунок 1: Хирургическое вмешательство, препарирование черепных окон и установка титанового стержня. (A) На...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
pK031. TRE-CreAuthors- style='background-color:#ffffff;color:#1a202c;font-family:Roboto;font-size:7pt;font-weight:normal; overflow:hidden;padding:0px 3px; vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Доступно из RIKEN BRC и Addgene
pK029. CAG-loxP-STOP-loxP-RFP-ires-tTA-WPREAuthors- style='background-color:#ffffff;color:#1a202c;font-family:Roboto;font-size:7pt;font-weight:normal; overflow:hidden;padding:0px 3px; vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Доступно из RIKEN BRC и Addgene
pK273. CAG-loxP-STOP-loxP-CyRFP-ires-tTA-WPREAuthors- style='background-color:#ffffff;color:#1a202c;font-family:Roboto;font-size:7pt;font-weight:normal; overflow:hidden;padding:0px 3px; vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Доступно из authors
IsofluraneWako099-06571
410 Анестезиологическое отделение (газовая машина изофлурана)Univentor8323101
Vetbond (тканевый клей)3M084-1469SB
MμltiFlex Round (совет по загрузке)Sorenson13810
Gelfoam (желатиновая губка)Pfizer09-0353-01
AgaroseSigmaA9793Низкая температура плавления
Обложка круглой формыMatsunami-'background-color:#ffffff;color:#1a202c;font-family:Roboto;font-size:7pt;font-weight:normal; overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Custom made
Unifast 2 (стоматологический цемент)GC- style='background-color:#ffffff;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>
Titanium barAuthors-'background-color:#ffffff;color:#1a202c;font-family:Roboto;font-size:7pt;font-weight:normal;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Сделано на заказ (см. рисунок 1G)
Rimadyl (carprofen)Zoetis-'background-color:#ffffff;color:#1a202c;font-family:Roboto;font-size:7pt;font-weight:normal; overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Injectable
2-фотонный микроскопZeissLSM7MP
Титан-сапфировый лазерSpertra-PhysicsMai-Tai eHPDS
Титановая пластинаAuthors-Сделано на заказ (см. рисунок 2A)
IMARIS, FilamentTracer, MeasurementProBITPLANE <
Goniometer stageThorlabsGN2/M
tr style='height:20px;'>

Reprints and Permissions

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission