Биолюминесцентная визуализация для изучения кальциевых транзиентов в структурах мозга дрозофил

Аннотация

Источник: Ларк, А. Р., et. al., подход к функциональной визуализации мозга in vivo на основе биолюминесцентного индикатора кальция GFP-aequorin. J. Vis. Exp.} (2016){{}}

Это видео демонстрирует визуализацию динамики кальция в реальном времени с помощью Грина. флуоресцентный белок-эквориновая биолюминесценция в глубоких структурах мозга Drosophila.

Протокол

1. Imaging

настройка
1. Запустите систему записи, включив микроскоп, компьютер, камеру и дренажную систему и установив контроль окружающей среды в комнате на 25 °C.
2. Prepare sample
   1. Поместите тарелку для монтажа изображения на крепление под микроскопом при 5-кратном увеличении и вставьте перфузионную трубку в канал через прокол.
   2. Recording
      1. Отрегулируйте скорость фотона до желаемой скорости записи (от 50 мсек до 1 сек и более). Выберите фотонный режим и откройте затвор. Записывайте генотип, пол, возраст и номер образца в журнальные записи. Отрегулируйте положение полей ROI (область интереса) над чашечкой и телами клеток (CCB) и медиальными лепестками, щелкнув поля ROI и перетащив их, удерживая клавишу Control.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Sodium chloride	Sigma-Aldrich	S3014
Calcium-chloride<	1023911000
HEPES	Sigma-Aldrich	7365-45-9
Potassium chloride	Prolabo	26 764.298
Magnesium chloride	Prolabo	25 108.295
Sucrose	Sigma-Aldrich	S0389
Nicotine	Sigma-Aldrich	N3876
ATP<	A2383	Аденозин 5'-трифосфат динатриевая соль гидрат
Benzyl-coelenterazine	Prolume, nanolight	Cat #301 Coelenterazine h	http://www.prolume.com/
Наконечники для пипеток	Corning Incorporated	4868	100-1000μL Univesal Pipette Tip
EM-CCD camera<	iXon (охлажденный до -80°C)
Microscope	Nikon	N/A	Eclipse-E800
Immersion objective lens	Nikon	N/A	20x Fluor .5w
Dissection microscope with fluescence	Leica MZ Fl III	N/A	leica dissection scope and fluerescent lamp
Peristaltic pump	Gilson	N/A	Minipuls 2
Tubing	Fisher Scientific	Зависит от толщины	Tygon R3603, St-Gobain
Perfusion system<	64-0135 (VC-66CS)	Система управления перфузионным клапаном, комплектная, с пережимными клапанами, 6 каналов
Perfusion regulators	Leventon	201108	Dosi-flow 3
Measurement and automation explorer	Science Wares & National Instruments	N/A	software http://sine.ni.com/nips/cds/view/p/lang/en/nid/1380
Photon imager	Science Wares & National Instruments	N/A	software http://sine.ni.com/nips/cds/view/p/lang/en/nid/1380
Photon viewer	Science Wares & National Instuments	N/A	software http://sine.ni.com/nips/cds/view/p/lang/en/nid/1380
Excel	Microsoft	N/A	software https://www.microsoft.com
Virtual dub	open access	N/A	software http://virtualdub.sourceforge.net/

td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word; wrap-strategy:4;'>Mercktd style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word; wrap-strategy:4;'>Sigma-Aldrichtd style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word; wrap-strategy:4;'>Andor<td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>DU-897E-CS0-#BVtd style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4; '>Warner