Флуоресцентная визуализация агрегации белка PolyQ в нейронах Caenorhabditis elegans

Аннотация

Источник: Pigazzini, M. L., et. al. Характеристика амилоидных структур при старении C. Elegans использование флуоресцентного визуализации в течение жизни. J. Vis. Exp. (2020).

Это видео демонстрирует использование флуоресцентной микроскопии с визуализацией в течение жизни (FLIM) для оценки агрегации белка polyQ в C. elegans нейроны, сравнивая контрольных и шаперонов с дефицитом белка. Повышенная агрегация у червей с дефицитом шаперона способствует передаче энергии между кластеризованными флуорофорами, сокращая время жизни флуоресценции. Карты с цветовой кодировкой, сгенерированные FLIM, отображают эти различия, выделяя уровни агрегации между экспериментальными группами.

Протокол

1. Получение данных FLIM

Результаты

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Ampicillin	Carl Roth GmbH + Co. KG	K029.3	Antibiotic
B&H DCS-120 SPC-150	Becker & Hickl GmbH		FLIM Aquisition software
B&H SPC830-SPC Image	Becker & Hickl GmbH		FLIM Aquisition software
C. elegans nQ40-CFP			Добрый подарок от Morimoto Lab
Deckgläser-18x18mm	Carl Roth GmbH + Co. KG	657.2	Cover slips
Leica M165 FC<		Монтажный стереомикроскоп
Leica TCS SP5	Leica Camera AG		Confocal Microscope
Levamisole Hydrochloride	AppliChem GmbH	A4341	Anesthetic
PicoQuant PicoHarp300	PicoQuant GmbH	<
Sodium Azide	Carl Roth GmbH + Co. KG	K305.1	Anesthetic
Standard-Objektträger	Carl Roth GmbH + Co. KG	656.1	Стеклянные слайды
Universal Agarose	Bio & Sell GmbH	BS20.46.500
Zeiss AxioObserver.Z1	Carl Zeiss AG	<
Zeiss LSM510-Meta NLO	Carl Zeiss AG		Confocal Microscope

td style='background-color:#ffffff;border-bottom:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;color:#1a202c;font-size:12pt;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:top;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Leica Camera AGtd style='background-color:#ffffff;border-bottom:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;color:#1a202c;font-size:12pt;overflow:hidden;padding:0px 3px; vertical-align:top;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>FLIM Aquisition softwaretd style='background-color:#ffffff;border-bottom:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;color:#1a202c;font-size:12pt;overflow:hidden;padding:0px 3px; vertical-align:top;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Confocal Microscope