Методическая статья

Ударный индентирование для оценки механических свойств ткани мозга мыши

17 июня 2025 г.

В этой статье

Аннотация

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Canovic, E. P., et. al., Характеристика многомасштабных механических свойств ткани мозга с помощью атомно-силовой микроскопии, ударного индентирования и реометрии. J. Vis. Exp. (2016)

В видео демонстрируется использование ударного вдавливания для измерения механических свойств гидратированной ткани мозга мыши, включая жесткость, рассеивание энергии и демпфирование, с помощью анализа смещения зонда и скорости.

Протокол

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все процедуры, связанные с образцами животных, были рассмотрены и одобрены соответствующим комитетом по этической экспертизе животных.

  1. Ударное отступирование
    1. Откалибруйте оснащенный наноиндентор и отрегулируйте настройки по умолчанию, чтобы можно было проводить эксперименты с динамическим воздействием на гидратированные ткани мозга в соответствии с инструкциями производителя.
      1. Установите сферический щуп, сдвинув его на маятник с помощью пинцета.
      2. Приклейте образец плавленого кварца на столб для образца, который вкручивается в поступательный стол.
      3. Перейдите в меню «Калибровка» и выберите «Жидкая ячейка». Следуйте инструкциям программного обеспечения, чтобы установить контакт с образцом плавленого кварца.
      4. Выберите "Normal" для типа индентора и используйте значение по умолчанию 0,05 мН для нагрузки индентора. Нажмите «Продолжить», чтобы выполнить калибровку для обычной конфигурации индентора.
      5. Отодвиньте предметный столик назад не менее чем на 5 мм. Установите рычаг, который позволяет опустить зонд в жидкостную ячейку, и повторите калибровку жидкостной ячейки в новой конфигурации, выбрав «Liquid Cell» в качестве типа индентора. Нажмите «Продолжить», чтобы получить коэффициент калибровки жидкого элемента.
      6. Активируйте опцию программного обеспечения Liquid Cell, перейдя в меню «Эксперимент» и выбрав «Специальные параметры». Используйте последнее значение калибровки.
      7. Увеличьте расстояние между пластинами конденсатора, так как это приведет к большей максимальной измеряемой глубине, что необходимо при тестировании материалов с высоким уровнем соответствия.
        1. В меню «Система» выберите «Незащищенные настройки» и «Параметры машины», чтобы изменить скорость тестовой нагрузки маятника, скорость нулевой нагрузки и смещение линейного изменения в режиме ожидания на 0,5 мН/с, 0,1 мН/с и 3 В соответственно.
        2. С помощью гаечного ключа поверните три гайки, которые управляют расстоянием между пластинами конденсатора, по часовой стрелке с небольшим шагом.
        3. После каждого полного поворота по часовой стрелке выберите «Регулировка коробки моста» в меню «Обслуживание» и проведите хороший маятниковый тест, который потребует перемещения противовесного груза от маятника.
        4. Повторяйте шаги 1.1.7.2-1.1.7.3 до тех пор, пока приблизительная калибровка по глубине не покажет значение 70 000 нм/В или выше.
      8. Установите новый ограничитель в нижней части маятника, который можно включать и выключать с помощью источника питания. Втяните исходный ограничитель, расположенный за маятником, чтобы устранить потенциальное препятствие для движения маятника и обеспечить более высокую скорость удара, а также большую глубину проникновения в податливые образцы.
      9. Дайте шкафу достичь теплового равновесия (требуется примерно 1 час).
      10. Пока шкаф уравновешивается, вернитесь в меню «Система» и выберите «Незащищенные настройки» и «Параметры машины». Установите скорость контакта калибровки глубины (dcal) на 1 мкм/с, скорость первичного контакта вдавливания на 3 мкм/с и скорость контакта со сверхнизкой нагрузкой на 1 мкм/с.
      11. В меню Калибровка выполните стандартную калибровку глубины в этой новой конфигурации.
      12. Включите блок питания для соленоида и установите его на 10 В. Перейдите в меню «Эксперимент» и выберите «Удар» и «Настроить смещение импульса». Следуйте инструкциям программного обеспечения (автоматическим подсказкам), чтобы откалибровать расстояние качания маятника.
  2. Поместите мозговую ткань мыши в жидкую клетку.
    1. После сбора всего мозга немедленно сохраните его в CO2-независимой питательной среде для взрослой нервной тканевой среды на льду.
    2. Когда настройка ударного вдавливания будет полностью завершена, осторожно перенесите мозг в чашку Петри вместе с CO2-независимой средой. Разрежьте мозг на части толщиной 6 мм с плоскими поверхностями с обеих сторон.
    3. Приклейте нарезанную ткань к алюминиевому столбу для образца тонким слоем цианоакрилатного клея.
    4. Наденьте жидкую ячейку на второе уплотнительное кольцо на стойке образца и заполните жидкую ячейку 5 мл CO2-независимой средой, чтобы полностью погрузить ткань. Затем этот столб для образца аккуратно устанавливается на трансляционный столик внутри оснащенного наноиндентора.
  3. Измерьте ударную реакцию тканей головного мозга.
    1. При необходимости снимите сферический щуп и замените его интересующим щупом, не снимая рычаг.
    2. В меню «Система» выберите «Незащищенные настройки» и «Параметры машины». Измените скорость первичного ударного контакта на 5 мкм/с.
    3. Когда ванна с образцом находится низко (направление -z) и находится далеко от маятника (+в направлении x), двигайтесь в направлении -x до тех пор, пока кончик рычага рычага не будет правильно расположен над ванной. Двигайтесь в направлении +z, пока наконечник полностью не погрузится в ванну и не окажется перед образцом.
    4. Используя окно управления столиком образца, осторожно установите контакт, а затем отодвиньте предметный столик от поверхности образца примерно на 30 мкм.
    5. В меню "Эксперимент" нажмите "Удар", чтобы настроить ударный эксперимент. Выберите конкретную импульсную нагрузку, которая будет напрямую связана с результирующей скоростью удара на основе калибровки расстояния замаха. Запустите запланированный эксперимент.
    6. Когда маятник качнется назад, а поверхность образца продолжает двигаться к плоскости измерения, выключите нижний ограничительный выключатель.
    7. Наблюдайте, как маятник качается вперед, чтобы ударить по образцу. Смещение датчика в зависимости от времени будет зафиксировано программным обеспечением.
    8. Когда появится окно стадии xyz, снова включите переключатель концевой остановки.
    9. Повторите шаги 3.4-3.8, чтобы протестировать как можно больше различных нагрузок и мест.
  4. Проанализируйте полученное смещение в зависимости от временной характеристики маятника с помощью настраиваемых сценариев MATLAB для определения максимальной глубины проникновения xmax, мощности рассеивания энергии K и коэффициента качества диэлектрических потерь Q.
    1. Перейдите в меню «Анализ» и экспортируйте данные в текстовый файл.
    2. Возьмите производную по времени профиля перемещения, чтобы получить скорость в зависимости от времени. Установите нулевое смещение в качестве точки контакта xo1.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Скорость удара vin - это максимальная скорость непосредственно перед контактом. xmax соответствует деформации, при которой скорость зонда сначала уменьшается до нуля. xo2, что эквивалентно xr, является положением, необходимым для повторного контакта с деформированным образцом в следующем цикле. Скорость отскока vout - это скорость при смещении xr.
    3. Определите K (без единиц) как энергию, рассеянную образцом, нормированную на сумму восстановленных и рассеянных энергий образца во время первого цикла удара. Рассчитайте K на основе внутренних свойств маятника (таких как жесткость при вращении и коэффициент демпфирования), xo1, xmax, xr, vin и vout.
    4. Поскольку смещение можно описать как затухающее гармоническое колебательное движение, подгоните экспоненциальную функцию затухания к максимумам кривой зависимости смещения от времени.
    5. Вычислите Q (без единиц) как π умножьте на количество циклов, необходимых для уменьшения амплитуды колебаний на коэффициент e. Более высокое значение Q означает меньшую скорость рассеивания энергии.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Среда гибернацииGibcoA1247501Независимая от углекислого газа нервная среда для тканей взрослого человека
Cell-TakCorning354240Биоадгезив, полученный из мидий
Оборудованный индентор, NanoTest VantageMicro Materials Ltd. Наконечник зонда должен быть обработан (стальной плоский пуансон, диаметр 1 мм, длина 4-5 мм)
NanoTest Liquid CellMicro Materials Ltd.}
}

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи