В этом видео демонстрируется чрескожная аспирация сперматозоидов придатка яичка у пациента с азооспермией, состоянием, характеризующимся отсутствием сперматозоидов в сперме. Процедура включает в себя дезинфекцию мошоночной области, аспирацию эпидидимальной жидкости с помощью шприца со специализированным культуральным раствором и обработку собранного образца для выделения жизнеспособных сперматозоидов. Подготовленные сперматозоиды затем готовы к использованию в передовых процедурах лечения бесплодия.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Методика чрескожной аспирации и обработки сперматозоидов придатка яичка матки
1.4K просмотров
⸱
15 января 2026 г.
В этой статье
Аннотация
Протокол
Все процедуры с участием людей были выполнены в соответствии с институциональными, национальными и международными руководящими принципами по благополучию человека и были рассмотрены местным институциональным наблюдательным советом.
1. Предоперационная подготовка
- Подготовка хирургических принадлежностей
- Подготовьте необходимые принадлежности для хирургической процедуры, включая один набор хирургических инструментов, два шприца по 5 мл, оснащенные иглой 0,7 мм (0,7 x 32 тонкостенные длинные скосы (TWLB)), 60 мл дезинфицирующего раствора, две пары стерильных резиновых перчаток и один кусок стерильной клеевой повязки.
- Попросите медсестер осмотреть упаковку хирургических инструментов, подвергнутых паровой стерилизации под высоким давлением, на предмет повреждений или истечения срока годности. Убедившись, что у него нет никаких проблем, поместите его на стол для инструментов и откройте внешний слой.
- Для андрологов: наденьте стерильные резиновые перчатки, затем откройте внутренний слой упаковки хирургических инструментов, чтобы проверить, соответствует ли требованиям лента индикатора стерилизации, а также убедиться, что все инструменты внутри укомплектованы.
- Подготовьте два шприца объемом 5 мл, оснащенных иглами 0,7 мм (0,7 x 32 TWLB) для анестезии и операции, а затем откройте ампулу, содержащую инъекцию лидокаина.
- Используйте стерильный шприц объемом 5 мл для аспирации инъекции лидокаина, впоследствии удаляя пузырьки воздуха из шприца.
- Подготовка пациента, перенесшего операцию
- Организуйте подготовку кожи для пациента. Побрейте промежность лобка с помощью одноразовой бритвы и промойте промежность и окружающую кожу мыльной водой, чтобы убедиться в отсутствии избытка лобка или пятен.
- Расположите пациента на операционном столе в положении для литотомии, снимите штаны и закрепите верхнюю одежду выше пупка, чтобы полностью обнажить промежность и нижнюю часть живота ниже пупка.
- Отрегулируйте угол наклона бестеневой лампы для того, чтобы освещать мошонку пациента.
- С помощью овальных щипцов захватите стерильный марлевый шарик, который затем полностью погружается в дезинфицирующий раствор, чтобы начать процесс дезинфекции. Проводите дезинфекцию кожи от периферии к мошонке в следующем порядке: низ живота, передняя и внутренняя часть бедер, область промежности, половой член и мошонка.
- После первичной дезинфекции замените стерильный марлевый шарик и повторите процесс дезинфекции. После трех раундов дезинфекции процесс предоперационной дезинфекции завершается.
- Приступайте к процессу укладки стерильных полотенец после того, как будет завершена дезинфекция. Сначала подложите стерильное квадратное полотенце под ягодицы пациента, затем расстелите стерильное дырявое полотенце вокруг операционной области и ее окружения, полностью обнажив мошонку в области отверстия.
- Приготовление культурального раствора G-MOPS-PLUS
- Попросите техников камеры эмбрионального культивирования перенести примерно 2 мл культурального раствора G-MOPS-PLUS в чашку для культивирования с помощью стерильной пипетки Пастера. Правильно закройте крышку, а затем доставьте ее медсестре в операционную через передаточное окно.
- Поставьте чашку для культуры на стерильное полотенце на столик для инструментов и откройте крышку.
- С помощью другого шприца объемом 5 мл отаскайте примерно 0,2 мл питательного раствора G-MOPS-PLUS, а затем удалите пузырьки воздуха для дальнейшего использования.
2. Анестезия и хирургия
- Для андрологов: держите в правой руке шприц, наполненный инъекцией лидокаина, а левой рукой фиксируйте семенной канатик пациента. Проколите подкожно и введите небольшое количество лидокаина, чтобы образовался волдырь. Затем проводят пункцию подкожно и углубляют в ткани семенного канатика, начиная вводить примерно 0,5 мл лидокаина после подтверждения отсутствия возврата крови. Для достижения лучшего эффекта блокады семенного канатика измените направление иглы от 2 до 3 раз в одной и той же точке прокола и повторите операцию введения лидокаина в семенной канатик.
- Держите мошонку пациента левой рукой, фиксируя придаток яичка, который требует прокола. Путем пальпации подтвердите расположение придатка яичка, где необходим хирургический прокол, с помощью правой руки. Затем возьмите в руки шприц, содержащий упомянутый выше лидокаин, и введите его под кожу в месте прокола для достижения местной инфильтрационной анестезии.
- Держите мошонку пациента левой рукой, фиксируя придаток яичка, который требует прокола. Затем возьмите в правую руку шприц объемом 5 мл, содержащий культуральный раствор G-MOPS-PLUS (0,2 мл) и проколите перпендикулярно коже, проникая в ткани придатка яичка. Поддерживайте отрицательное давление в шприце и многократно прокалывайте ткань придатка яичка так, чтобы жидкость придатка яичка попала через иглу под действием отрицательного давления.
- Продолжайте поддерживать отрицательное давление и медленно извлекайте пункционную иглу. Введите экстрагированную жидкость из придатка яичка в чашку для культивирования. После завершения инъекции аспирируйте близлежащий культуральный раствор G-MOPS-PLUS для промывания шприца, чтобы максимизировать количество собранной жидкости из придатка яичка, вводимой в чашку для культивирования.
3. Лечение хирургических образцов
- }Поиск и наблюдение за сперматозоидами придатка яичка
- {{}}
- Передача чашки для культивирования, содержащей культуральную жидкость G-MOPS-PLUS и жидкость придатка яичка, лаборанту эмбрионов через окно переноса.
- Лаборанты комнаты эмбрионального культивирования берут на себя чашку для культивирования и помещают ее на столик инвертированного оптического микроскопа, фиксируя ее. Включите выключатель питания микроскопа и поверните кнопку регулировки света до нужной интенсивности света.
- Вращайте преобразователь перевернутого оптического микроскопа, выбирайте объектив с 10-кратным увеличением, вращайте по очереди спирали грубой и тонкой фокусировки для регулировки фокусного расстояния. Наблюдайте за фокусировочной ситуацией и ищите сперматозоиды придатка яичка под микроскопом.
- Продолжайте вращать преобразователь инвертированного микроскопа к объективу с 40-кратным увеличением, вращайте тонкую спираль фокусировки для регулировки фокусного расстояния и наблюдайте за сперматозоидами придатка яичка за полем. Оцените количество и качество сперматозоидов придатка яичка. Видно, что нормальные сперматозоиды придатка яичка созрели и приобрели способность к движению.
- Лечение сперматозоидов придатка яичка
- Наблюдая достаточную активность сперматозоидов придатка яичка, перенесите жидкость в чашке для культивирования в центрифужную пробирку объемом 15 мл через стерильную пипетку Пастера.
- Поместите указанную выше центрифужную пробирку на балансировочный лоток и используйте центрифужную пробирку той же спецификации, содержащую стерильную воду, до уровня.
- Откройте дверцу центрифуги, симметрично поместите пробирки центрифуги в слот для карты, а затем закройте дверцу центрифуги. Установите центробежную силу на 500 x g и время центрифугирования на 5 минут через панель управления. Нажмите кнопку START ) на панели управления, чтобы начать процесс центрифугирования.
- После завершения процесса центрифугирования откройте дверцу центрифуги и извлеките центрифужную трубку, содержащую жидкость придатка яичка. Открутите крышку, аккуратно аспирируйте надосадочную жидкость стерильной пастеровской пипеткой и выбросьте вытянутую надосадочную жидкость.
- С помощью стерильной пипетки Пастера перенесите примерно 2 мл питательного раствора G-IVF-PLUS в центрифужную пробирку. Затем аккуратно пипеткой накачайте раствор в центрифужную пробирку для тщательной ресуспензии.
- Повторите процессы балансировки, центрифугирования и удаления верхнего слоя жидкости.
- В зависимости от необходимости интрацитоплазматической инъекции сперматозоидов (ИКСИ) перенесите примерно 0,5 мл культурального раствора G-IVF-PLUS в центрифужную пробирку с помощью стерильной пипетки Пастера и осторожно выдуйте сперматозоиды из придатка яичка на дне центрифужной пробирки, чтобы они полностью подвешены.
- Используйте тщательно взвешенные сперматозоиды придатка яичка непосредственно для процесса ИКСИ.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Centrifuge | |||
| Centrifuge tube | |||
| Комбинированная подставка для пробирки | |||
| Дезинфицирующий раствор | |||
| G-IVF PLUS | |||
| G-MOPS PLUS | |||
| High Security Embryo Pasteur Pipettes | |||
| Inverted optical microscope | |||
| Введение гидрохлорида лидокаина | |||
| Medical balance | |||
| Medical surgical masks | |||
| Рабочий стол с электроприводом | |||
| Self-Adhesive Wound Dressing | |||
| Стерильные шприцы для подкожных инъекций для одноразового использования | |||
| Стерильная латексная хирургическая перчатка без порошка | |||
| Surgical light | |||
| Vertical flow clean table |
Теги
