Флуоресцентная микроскопия полного внутреннего отражения для визуализации экзоцитарных событий

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Winkle, C. C., et al. Использование комбинированных методологий для определения роли доставки плазматических мембран во время ветвления аксонов и морфогенеза нейронов. J. Vis. Exp. (2016)

В этом видео демонстрируется флуоресцентная микроскопия полного внутреннего отражения (TIRF) для визуализации экзоцитарных событий в корковых нейронах. pH-чувствительный маркер зеленого флуоресцентного белка (GFP) флуоресцирует при слиянии везикул, при этом селективное возбуждение TIRF захватывает проксимальный экзоцитоз мембраны при покадровой визуализации.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Визуализация экзоцитарных событий с помощью флуоресцентной микроскопии с полным внутренним отражением (TIRF)

Примечание: Для этого протокола требуется специализированное оборудование для микроскопии, включая камеру для поддержания температуры, влажности и углекислого газа (CO₂), микроскоп с инвертированным флуоресцентным внутренним отражением (TIRF), оснащенный эпифлуоресцентным освещением, объектив TIRF с большим увеличением и высокой числовой апертурой (NA), автоматизированный XYZ. и детектор чувствительного устройства с зарядовой связью (ПЗС). В этом протоколе используется полностью автоматизированный инвертированный микроскоп, осна....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
Name	Company	Catalog Number	Comments
35 мм стеклянное дно посуды для визуализации живых клеток	Matek Corporation	p356-1.5-14-C	Должны быть покрыты поли-D-лизином 1 мг/мл и промыты перед покрытием клеток
Olympus IX81-ZDC2 инвертированный микроскоп	Olympus
Лямбда LS ксеноновая лампа	Sutter Instruments Company
Экологическая сцена топ инкубатор	Tokai Hit
100x 1.49 NA TIRF объектив	Olympus
Andor iXon EM-CCD	Andor
Cell TIRF управляющее программное обеспечение	Olympus		Программное обеспечение, используемое для управления лазеры для визуализации TIRF Fiji
(Image J)	NIH	ImageJ version 1.49t
Кролик поликлональный античеловеческий VAMP2	Cell signaling	11829
Poly-D-лизин	Sigma	p-7886	Растворенный в стерильной воде со скоростью 1 мг/мл

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission