Визуализация реакций коленчатых ганглиозных нейронов in vivo с помощью эпифлуоресцентной микроскопии

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Запустите tastant panel
   1. Используйте всасывание для удаления жидкости из колена. При необходимости можно разместить абсорбирующую точку, чтобы уменьшить просачивание и облегчить навигацию под микроскопом.
   2. Поместите животное на впитывающую прокладку под микроскопом. Найдите коленчатый ганглий: полезные ориентиры включают отверстие, оставленное в булле, отверстие в височной кости и седьмой нерв. Используя фильтр FITC/GFP (флуоресцеин изотиоцианат/зеленый флуоресцентный белок) на эпифлуоресцентном эндоскопе, проверьте наличие отдельных GCaMP-экспрессирующих коленчатых ганглиозных нейронов. 10-кратный объектив (рабочее расстояние 10 мм) обеспечит достаточное разрешение для отслеживания активности отдельных клеток, но также можно использовать 20-кратный объектив (рабочее расстояние 12 мм).
   3. Плотно поместите дозирующую иглу для вкусовой линии в рот животного. Поместите чашку Петри под рот животного, чтобы собирать жидкость.
   4. Убедитесь, что камера смотрит в поле зрения микроскопа. Синхронизируйте начало видеосъемки с началом презентации.
   5. Во время записи следите за реакцией, дрейфом и просачиванием в реальном времени.