Методическая статья

Визуализация высвобождения нейротрансмиттеров с помощью флуоресцентных репортеров на основе клеточных нейротрансмиттеров

802 просмотров

17 июня 2025 г.

В этой статье

Аннотация

Источник: Lacin, E., et al. Создание флуоресцентных репортеров на основе клеточных нейротрансмиттеров (CNiFERs) для оптического детектирования нейротрансмиттеров in vivo. J. Vis. Exp. (2016)

В этом видео демонстрируется техника визуализации высвобождения нейротрансмиттеров in vivo с использованием флуоресцентных репортеров на основе клеточных нейротрансмиттеров (CNiFERs), специализированных репортерных клеток, предварительно вводимых в кору головного мозга мыши. Расположенная под двухфотонным микроскопом, мышь позволяет визуализировать индуцированную нейротрансмиттерами передачу сигналов кальция через флуоресцентное излучение. Метод использует связывание нейротрансмиттеров с рецепторами, связанными с G-белком, на CNiFER, вызывая высвобождение кальция и флуоресценцию для обнаружения активности нейротрансмиттеров в режиме реального времени.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. CNiFER Имплантация в кору головного мозга мыши

  1. : Перед операцией стерилизуйте все хирургические инструменты в автоклаве. Подготовьте полустерильное поле к операции, протерев 70% этанолом и положив чистый лабораторный подгузник.
  2. Подготовьте инъекционную пипетку CNiFER, потянув стеклянный капилляр (внутренний диаметр 0,53 мм) за вертикальный электродный съемник. Используйте пару щипцов No 5 с тонким наконечником, чтобы сломать кончик электрода до диаметра ~40 мкм.
    Примечание: ....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
cyanoacrylate клейLoctiteno. 495хирургия и стереотаксическая инъекция
пластиковая парафиновая пленкаVWRПарапленка®хирургия и стереотаксическая инъекция
NANOINJECTORDrummond3-000-204хирургия и стереотаксическая инъекция
СТЕКЛЯННЫЕ ЭЛЕКТРОДЫDrummond3-000-203Gхирургия и стереотаксическая инъекция
ручная дрельOSADAExl-M40хирургия и стереотаксическая инъекция
Заусенцы для бормашиныFine Scientific19007-05; 19007-07)хирургия и стереотаксическая инъекция
Стерилизующая ваннаFST18000-45, горячая бусина Стерилизаторнаяхирургия и стереотаксическая инъекционная
изофлурановая камера/маскаHighland Medical Equipment564-0427, Настольный анестезиологический аппарат HME 109 с испарителем изофлурана, расходомер O2, ганг-клапан; 564-0852, Индукционная камера 16X7X7,5 смхирургия и стереотаксическая инъекция
3D эндоскоп с рукойZeiss хирургия и стереотаксическая инъекция
волоконно-оптического света хирургия и стереотаксическая инъекция
Бетадиновая хирургия и стереотаксическая инъекция
70 % (v/v) изопропиловый спирт хирургия и стереотаксическая инъекция
Povidone-Iodine Prep Padsdynarex1108хирургия и стереотаксическая инъекция
NaCl 0,9% (ИНЪЕКЦИЯ, USP, 918610) хирургия и стереотаксическая инъекция
ЦИКЛОСПОРИН (ИНЪЕКЦИЯ, USP) хирургия и стереотаксическая инъекция
Бупренекс (ИНЪЕКЦИЯ) бупренорфин (0,03 мкг на г грызуна)Сигма хирургия и стереотаксическая инъекция
Офтальмологическая мазьAkornNDC 17478-235-35хирургия и стереотаксическая инъекция
SurgifoamEthiconхирургия и стереотаксическая инъекция
Grip стоматологический цементDentsply#675571, 675572хирургия и стереотаксическая инъекция
Instant SuperGlueNDindustries хирургия и стереотаксическая инъекция
LOCTITE 4041 хирургия и стереотаксическая инъекция
METABONDC&B хирургия и стереотаксическая инъекция
No 0 крышка стеклаФишер хирургия и стереотаксическая инъекция
стереотаксическая рамкаKopf хирургия и стереотаксическая инъекция
ректальный зонд и грелкаFHC40-90-8D, регулятор температуры постоянного тока, 40-90-2-06, грелка 6,5X9,5 см40-90-5D-02, ректальный термисторный зондхирургия и стереотаксическая инъекция
оптическая макетная плата для визуализацииThorlabs хирургия и стереотаксическая инъекция
Минеральное маслоFisherS55667хирургия и стереотаксическая инъекция
Kwik-Cast (силиконовый эластомер)World Precision Instruments хирургия и стереотаксическая инъекция
ШовEthicon18'', 1667, 4-0хирургия и стереотаксическая инъекция
НожницыFine Scientific Tools91500-09, 15018-10хирургия и стереотаксическая инъекция
ForceptsFine Scientific Tools11252-30; #55, 11295-51; Grafe, 11050-10хирургия и стереотаксическая инъекция
Студент Холстед-Комар ГемостатикиТонкие научные инструменты91308-12хирургия и стереотаксическая инъекция
Набор для прижигания малых сосудовТонкие научные инструменты18000-00хирургия и стереотаксическая инъекция
Стерилизаторы горячих шариковТонкие научные инструменты18000-45хирургия и стереотаксическая инъекция
Чехол для инструментов с силиконовым коврикомFine Scientific Tools20311-21хирургия и стереотаксическая инъекция
Пластиковые стерилизационные контейнеры с силиконовым коврикомFine Scientific Tools20810-01хирургия и стереотаксическая инъекция
2P фиксированный флуоресцентный эндоскоп для визуализации in vivoOlympusFV1200 MPEin vivo визуализация
Многофотонный лазерSpectraPhysicsMai Tai DeepSeein vivo imaging
Green LaserOlympus473 нм Лазерin vivo imaging
xy база трансляцииScientificaMMBPin vivo imaging
FRET фильтр куб для YFP и CFPOlympus in vivo imaging
25-X водный иммерсионный объективOlympus in vivo imaging
air tableNewport
Изготовленная на заказ светонепроницаемая клеткаThorlab in vivo imaging

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

CNiFERsG

Похожие статьи