Визуализация тромбов головного мозга мышей с помощью флуоресцентной визуализации в ближнем инфракрасном диапазоне

Аннотация

Источник: Kim, D. E., et al. Комбинированная флуоресцентная визуализация в ближнем инфракрасном диапазоне и микрокомпьютерная томография для непосредственной визуализации тромбоэмболов головного мозга. J. Vis. Exp. (2016)

В этом видео демонстрируется флуоресцентная визуализация в ближнем инфракрасном диапазоне (NIRF) для визуализации тромбов в иссеченной ткани мозга, помеченной фибрин-специфическим зондом. Ближний инфракрасный свет возбуждает зонд, заставляя тромб флуоресцировать, что позволяет визуализировать тромбы с высокой контрастностью в основной мозговой артерии и мелких корковых кровеносных сосудах.

Протокол

Все процедуры, связанные с образцами животных, были рассмотрены и одобрены соответствующим комитетом по этической экспертизе животных.

1. Визуализация тромба тканей головного мозга в ближнем инфракрасном диапазоне (NIRF)Ex vivo

1. После обезглавливания удалите кожу головы и разрежьте череп ножницами от большого затылочного отверстия вверх к сагиттальному шву. Удалите свод черепа, осторожно приподняв края разрезанного черепа с помощью ножниц, избегая при этом травмирования подлежащего мозга, тем самым обнажая полушария.
2. Вырежьте зрительные нервы в основании мозга как можно ближе к поверхности мозга, потому что они могут перекрываться с окружностью виллизиловых артерий (COW), которую следует визуализировать на флуоресцентной визуализации в ближнем инфракрасном диапазоне (NIRF). Затем, чтобы визуализировать Y-образную форму «средняя мозговая артерия (MCA) / передняя мозговая артерия (ACA) / дистальная внутренняя сонная артерия (ICA)» для визуализации тромба NIRF, вырежьте дистальные ICAs как можно дальше к поверхности мозга после осторожного сжатия основания мозжечка, чтобы обнажить точки разреза (рис. 1A).
3. Проведите визуализацию NIRF (возбуждение/излучение, 675 / 690 нм; экспозиция 1 сек) удаленной ткани головного мозга основанием вверх (рис. 1B, C), которая визуализирует флуоресцентно меченные тромбоэмболии в артериях COW (рис. 1D). Затем выполните дополнительную визуализацию с направлением вверх вершины мозга, которая визуализирует корковые тромбоэмболии. Избегайте пересыхания мозга, нанеся несколько капель физраствора на ткани.

Результаты

Рисунок 1: Обзор визуализациитромбоэмболииголовного мозга с помощью флуоресцентной визуализации ближнего инфракрасного диапазона (NIRF). (А и В) Репрезентативная ткань мозга была удалена у мыши с тромбоэмболически...

Материалы