Визуализация тромбов головного мозга мышей с помощью флуоресцентной визуализации в ближнем инфракрасном диапазоне

Все процедуры, связанные с образцами животных, были рассмотрены и одобрены соответствующим комитетом по этической экспертизе животных.

1. Визуализация тромба тканей головного мозга в ближнем инфракрасном диапазоне (NIRF)Ex vivo

1. После обезглавливания удалите кожу головы и разрежьте череп ножницами от большого затылочного отверстия вверх к сагиттальному шву. Удалите свод черепа, осторожно приподняв края разрезанного черепа с помощью ножниц, избегая при этом травмирования подлежащего мозга, тем самым обнажая полушария.
2. Вырежьте зрительные нервы в основании мозга как можно ближе к поверхности мозга, потому что они могут перекрываться с окружностью виллизиловых артерий (COW), которую следует визуализировать на флуоресцентной визуализации в ближнем инфракрасном диапазоне (NIRF). Затем, чтобы визуализировать Y-образную форму «средняя мозговая артерия (MCA) / передняя мозговая артерия (ACA) / дистальная внутренняя сонная артерия (ICA)» для визуализации тромба NIRF, вырежьте дистальные ICAs как можно дальше к поверхности мозга после осторожного сжатия основания мозжечка, чтобы обнажить точки разреза (рис. 1A).
3. Проведите визуализацию NIRF (возбуждение/излучение, 675 / 690 нм; экспозиция 1 сек) удаленной ткани головного мозга основанием вверх (рис. 1B, C), которая визуализирует флуоресцентно меченные тромбоэмболии в артериях COW (рис. 1D). Затем выполните дополнительную визуализацию с направлением вверх вершины мозга, которая визуализирует корковые тромбоэмболии. Избегайте пересыхания мозга, нанеся несколько капель физраствора на ткани.

Рисунок 1: Обзор визуализациитромбоэмболииголовного мозга с помощью флуоресцентной визуализации ближнего инфракрасного диапазона (NIRF). (А и В) Репрезентативная ткань мозга была удалена у мыши с тромбоэмболическим инсультом. Примите меры предосторожности, чтобы не потерять тромбоэмболы (красная стрелка) в области бифуркации средней мозговой артерии (МКА) – передней мозговой артерии (ДХА) дистального отдела внутренней сонной артерии (ВСА, синие стрелки) при удалении головного мозга. (С и D) Ex vivo Визуализация тромба NIRF. Мозговая ткань помещается внутрь светонепроницаемой камеры тепловизора NIRF (C) для визуализации тромба (красная стрелка на D), предварительно помеченного флуоресцентным маркером C15 Cyanine 5.5 (Cy5.5) перед эмболической окклюзией области бифуркации MCA-ACA.