Интраназальное введение лекарств мышам с помощью пипетки и обратной канюляции для доставки лекарств через нос в мозг

Аннотация

Источник: Kanazawa, T., et al. Новые методы интраназального введения под ингаляционной анестезией для оценки доставки лекарств из носа в мозг. J. Vis. Exp. (2018)

В этом видео показано интраназальное введение радиоактивных меченых препаратов мышам, находящимся под наркозом, для достижения доставки лекарств от носа к мозгу. В нем объясняется, как лекарства проникают через носовой эпителий и перемещаются по нейронным путям, чтобы достичь мозга, а также как движение ресничек влияет на удержание и клиренс лекарств. Кроме того, в видео описывается альтернативный метод обратной канюляции, который включает в себя введение канюли через пищевод для доставки лекарств против движения ресничек, улучшения удержания и повышения эффективности транспортировки.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Животные, используемые для интраназального введения под ингаляционной анестезией

1. : экспериментальные мыши содержатся в клетках из нержавеющей стали в течение 12-часового цикла свет/темнота (свет с 8:00 утра до 8:00 вечера), с контролируемой температурой, поддерживаемой на уровне 23 ± 1°C, влажностью 50% ± 10% и свободным доступом к пище и воде.
2. Перед экспериментом обезболите мышей путем ингаляции 2% изофлурана с последующей стимуляцией в концентрации 4%. Подтвердите необходимый уровень обезболивания, проверив на исчезновение поверхностного выпрямления.

2. Приготовление раствора для введения

1. Приготовьте раствор для введения [¹⁴С]-инулина (50 мкМ, 0,5 мкКи/мл на мышь) путем разбавления в фосфатно-солевом буфере и храните при температуре 4 °С до использования.

3. Интраназальное введение мышам

1. методом микропипетки с использованием временно открываемой ингаляционной маски (Рисунок 1)
   1. Зафиксировать мышей в лежачем положении на спине на пробковой доске, наложив на их конечности под ингаляционную анестезию 2% изофлурана (Рисунок 1A).
   2. Вводите в общий объем 25-литрового раствора каждой мыши с интервалом в 30 секунд дозами от 1 до 2 литров, поочередно вводимыми в левую и правую ноздри, в то время как мыши фиксируются под ингаляционной анестезией (рис. 1B и C).
   3. Примечание: Отходящий анестетический газ удаляется активными средствами (вытяжной шкаф, жесткий воздуховод биозащитного шкафа, пылесос и т.д.) при открытии маски и пассивными способами (баллон с отработанным анестетиком) в закрытом состоянии.
2. Метод обратной канюляции со стороны дыхательных путей через пищевод (Рисунок 2)
   1. Зафиксируйте мышей в лежачем положении на пробковой доске, наложив на их конечности ингаляционную анестезию 2% изофлурана.
   2. Волосы на шее сбриваются и подготавливаются с помощью бетадина или хлоргексидина, а затем ополаскиваются спиртом.
   3. Обнажите трахею и пищевод, расширив кожу ниже горла щипцами, предварительно сделав небольшой разрез (1,5 см) ножницами.
   4. Сделайте надрез (1 мм) в трахее с помощью ножниц.
   5. Вставьте канюлю (внутренний диаметр: 0,58 мм, внешний диаметр: 0,965 мм) на длину 1,2 см и прикрепите противоположный конец канюли к внутренней стороне ингаляционной маски.
   6. Сделайте разрез (1 мм) в пищеводе с помощью ножниц, вставьте канюлю (внутренний диаметр: 0,28 мм, внешний диаметр: 0,61 мм) на длину 1,4 см в сторону задней части носовой полости и перевязайте ее (рис. 2А и Б). Примечание: Процедуры с 3.2.2 по 3.2.4 проводились под стереоскопическим микроскопом при увеличении ×10.
   7. Присоедините иглу (27G × 1/2) к шприцу объемом 1 мл, наполненному раствором для введения, и подключите к программируемому микрошприцевому насосу.
   8. Подсоедините вышеуказанную иглу к канюле, которая была введена в пищевод в точке 3.2.5 (рисунок 2C).
   9. Вводите в общем объеме 25 мкл [¹⁴С]-инулина в постоянном темпе (5 мкл/мин) (рис. 2C и 2D).

Результаты

Рисунок 1: Интраназальное введение с использованием микропипетки в сочетании с временно открываемой ингаляционной маской. Фотографии, на которых изображена неподвижная мышь (А) с закрытой маской до введения, (В) крупным планом и (В) все виды ...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
ddY mouse	Japan SLC, Inc.		Мужчина, 4-6 недель, 20-30 г
Изофлуран	Pfizer	v002139
Установка Изофлурана	SHINANO manufacturing CO. LTD.	SN-487-OTAir, SN-489-4
Изофлурановая маска	SHINANO manufacturing CO. LTD.		Для мелких грызунов
маска Изофлуран (тип Opneable)	SHINANO manufacturing CO. LTD.		По специальным заказам
Бокс для анестезии	SHINANO manufacturing CO. LTD.	SN-487-85-02
Ножницы для экспериментов на животных-1	NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD.	B-27H
Ножницы для экспериментов на животных-2	NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD.	B-13H
Пинцет-1	FINE SCIENCE TOOLS Inc.	11272-30	Dumont #7 Пинцет Dumoxel-2
	NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD.	Канюля А-12-1
(ПЭ-50)	Бектон, Дикинсон и компания.	5069773	Внутренний диаметр: 0,58 мм, Наружный диаметр: трубка канюли 0,965 мм
(SP-10)	NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD.	KN-392	Внутренний диаметр: 0,28 мм, Наружный диаметр: 0,61 мм
Шейвер	MARUKAN, LTD.	DC-381
Стереоскопический микроскоп	Olympus Corporation	SZ61
Игла 27G 1/2 в 13 мм	TERUMO CORPORATION	NN-2738R
1 мл шприц	TERUMO CORPORATION	SS-01T
Шприцевой насос	Neuro science	NE-1000
Micro шпатель	Shimizu Akira Inc.	91-0088
Микропипетка (0,5-10 мкл)	Eppendorf AG	Z368083
Чип для пипетки	Eppendorf AG	0030 000.811
Лента	TimeMed Labeling System, Inc.	T-534-R	Для фиксации мыши
[¹⁴C]-инулина	American Radiolabeled Chemicals Inc.	ARC0124A	0,1 мКи/мл
этии	Wako Pure Chemical Industries, Ltd.	054-00461

(Английский

)