$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.
1. Биолюминесцентная визуализация GL261 Tumor Growth
- Spray обильное количество дезинфицирующего средства (0,05% раствор диметиламмония хлорида) на чистом бумажном полотенце. С помощью бумажного полотенца, смоченного в дезинфицирующем средстве, тщательно протрите черную простыню, носовые конусы и перегородку внутри камеры визуализации, где животные будут контактировать с устройством. Тщательно протрите все поверхности чистым сухим бумажным полотенцем. Повторите это еще раз и подождите 5 минут.
- Инициализируйте станцию формирования изображений.
- Обезболивайте мышь смесью объемом 300 мкл, содержащей 200 мкл кетамина/ксилазина и 100 мкл люциферина (D-люциферина калийной соли, 150 мг/кг) путем внутрибрюшинного введения.
- Подождите 10 минут после инъекции и подтвердите, полностью ли мыши находятся под наркозом, зажав хвост. Чтобы настроить систему обработки изображений, выберите «Люминесцентное», «Авто» время экспозиции и «Среднее». Поместите мышей на станцию визуализации и нажмите кнопку «Захватить», чтобы начать изображение. Следите за тем, чтобы время после инъекции соответствовало каждому сеансу визуализации.
- После успешного получения изображения должно появиться окно изображения и палитра инструментов. Нажмите на интересующую область (ROI) или «Инструменты ROI» и выберите «авто» на круглом значке. Чтобы определить ROI, обведите область сигнала на изображении, а затем измерьте ROI в единицах фотонов/сек/ср/см2.
- Выньте мышей из камеры визуализации и наблюдайте за ними до тех пор, пока они не станут передвигаться и не сохранят нормальную активность. Как правило, время восстановления составляет примерно 15 минут. Не возвращайте мышей в клетку с другими животными до тех пор, пока они полностью не оправятся от наркоза.
- Контролируйте рост опухоли с помощью биолюминесцентной визуализации два раза в неделю до тех пор, пока у животных не появятся следующие симптомы: потеря веса (потеря более 20% по сравнению с весом до имплантации), отсутствие аппетита (полная анорексия в течение 24 часов) и отсутствие устойчивой целенаправленной реакции на мягкие раздражители (слабая попытка встать), после чего их следует усыпить.
- Нормализуйте значения люминесценции за каждый день относительно соответствующих показаний, полученных в первый день биолюминесцентной визуализации (рис. 1А).
- Для статистического анализа постройте кривые выживаемости с помощью оценки Каплана-Мейера и сравните различия между кривыми выживаемости с помощью логарифмического рангового теста.
