В этом видео показана визуализация срезов ткани глиобластомы, экспрессирующих зеленый флуоресцентный белок (GFP), с помощью конфокальной микроскопии. Изображения с высоким разрешением захватываются через определенные промежутки времени, чтобы отслеживать движение и направление опухолевых клеток.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Визуализация миграции опухолевых клеток в ткани глиобластомы с помощью покадровой сканирующей конфокальной микроскопии
678 просмотров
⸱
17 июня 2025 г.
В этой статье
Аннотация
Протокол
Все процедуры по сбору проб были выполнены в соответствии с рекомендациями института IRB.
1. Мечение опухолевых клеток с помощью зеленого флуоресцентного белка, экспрессирующего ретровирус
ПРИМЕЧАНИЕ: Покадровая микроскопия для анализа миграции опухолевых клеток требует стабильного, долгосрочного флуоресцентного мечения клеток в культуре среза. Использование ретровируса рекомендуется потому, что он избирательно инфицирует делящиеся клетки, тем самым обогащая флуоресцентное мечение в популяции опухолевых клеток, в отличие от микроглии или других типов клеток, присутствующих в срезе. Стандартизация инфекц....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| DMEM High Glucose | Invitrogen (Gibco) | 11960-044 | |
| Neurobasal-A Medium, минус феноловый красный | Invitrogen (Gibco) | 12349-015 | |
| B-27 Supplement (50X), без сыворотки | Invitrogen (Gibco) | 17504-044 | |
| Пенициллин-стрептомицин (10,000 ЕД/мл) | Инвитроген (Gibco) | 15140-122 | |
| Добавка GlutaMAX | Invitrogen (Gibco) | 35050-061 | |
| L-глютамин (200 мМ) | Инвитроген (Gibco) | 25030-081 | |
| ГЕПС (1 мес) | Инвитроген (Gibco) | 15630-080 | |
| Нистатин Суспензия | Sigma-Aldrich | N1638-20ML | 10 000 ед/мл в DPBS, асептически обработанная, биореагент, подходит для клеточной культуры |
| UltraPure Low Melting Point Agarose | Invitrogen (Gibco) | 16520-050 | Плавится при 65,5 С, остается жидким при 37 С и быстро схватывается ниже 25 С. |
| Изолектин GS-IB4 из Griffonia simplicifolia, Alexa Fluor 647 Conjugate | Thermo Fisher (Molecular Probes) | I32450 | Используется в средах для маркировки микроглии/макрофагов |
| pRetroX-IRES-ZsGreen1 Vector | Clonetech | 632520 | |
| Концентратор Retro-X | Clonetech | 31455 | Связывающая смола для неультрацентрифугирования концентрации вирусных надосадочных пластов |
| pVSG-G Vector | Clonetech | 631530 | входит в состав универсальной системы экспрессии ретровирусов Retro-X |
| GP2-293 Вирусные упаковочные клетки | Clonetech | 631530 | входит в состав универсальной системы экспрессии ретровирусов Retro-X |
| Цианоакрилатный клей (суперклей) | Sigma-Aldrich | Z105899 | Форма для |
| встраивания методом отслаивания средней вязкости (квадрат - S22) | Polysciences, Inc. | 18646A-1 | Формы для встраивания образца опухоли |
| Микрошпатели из нержавеющей стали | Fisher | Scientific S50823 | Изгиб инструмента под углом 45 градусов на горловине лезвия ложки |
| Изогнутый Fisherbrand Препарирующие тонкозаостренные щипцы | Fisher Scientific | 08-875 | |
| Лезвие бритвы с одним лезвием (американские безопасные бритвы) | Fisher Scientific | 17-989-001 | Толщина кромки лезвия составляет 0,009 дюйма. Гофрированная крышка с тупым краем снимается перед загрузкой на вибратом. |
| Leica VT1000 S Vibratome | Leica Biosystems | VT1000 S | |
| Вставка для гидрофильной клеточной культуры из ПТФЭ | EMD Millipore | PICM0RG50 | 30 мм, гидрофильный ПТФЭ, 0,4 мкм размер пор |
| 35 мм Стеклянная посуда с дном | MatTek | P35G-1,5-20-C Втулка | стекла 20 мм. Покровное стекло толщиной 1,5 |
| LSM 510 Конфокальный микоскоп | Zeiss | LSM 510 | 10x Air Objective (c-Apochromat NA 0,45) |
| PECON Stagetop Incubator | PeCON Germany | (Снято с производства) | Инкубатор PM 2000 RBT - это совместимый продукт, предназначенный для использования с микроскопами Zeiss. |
