Взрослый родившихся нейронов выражения ChR2 можно манипулировать в ломтик электрофизиологических подготовку для того, чтобы изучить их вклад в функцию обонятельных нейронных цепей.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Использование Доступное Светодиодные массивы для фото-стимуляция нейронов
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Стандартный электрофизиологии срез позволил исследователям зонда отдельных компонентов нервной системы путем записи электрических ответов одиночных клеток в ответ на электрические или фармакологических 1,2 манипуляций. С изобретением методов оптического контроля генетически целевых нейронов (optogenetics), исследователи теперь имеют беспрецедентный уровень контроля над конкретными группами нейронов в стандартной подготовки срез. В частности, светочувствительной channelrhodopsin-2 (ChR2) позволяет исследователям для активации нейронов с 3,4 свет. Объединив осторожны калибровки светодиодных фотостимуляцией ChR2 со стандартными электрофизиологии ломтик, мы в состоянии зонд с более подробно роль взрослого родился интернейронов в обонятельной луковице, первый центральный реле обонятельной системы. Использование вирусного выражение ChR2-YFP специально у взрослых родившихся нейронов, мы можем выборочно контролировать молодых взрослых родился нейронов в среде старыхг зрелых нейронов. Наши оптические управления использует простые и недорогие светодиодные системы, и мы покажем, как эта система может быть откалиброван, чтобы понять, сколько света необходимо, чтобы вызвать пики активности в отдельных нейронов. Таким образом, короткие вспышки голубого света могут удаленно контролировать стрельбу структуры ChR2-трансдуцированных новорожденных клеток.
Протокол
1. Оптический калибровки: измерение LED Power
- Прикрепить светодиодов на радиатор с активным охлаждением с помощью вентилятора и закрепить этот светодиод / радиатор aparatus к коллимирующей линзы.
- Замените лампы, используемые в светлое освещение с LED / радиатор / вентилятор / объектив аппарата. Этот аппарат должен быть тщательно расположены так, чтобы коллимированный светодиодный луч движется по прямой оптический путь к конденсатора линзы. Убедитесь, что радиатор / вентилятор заземлена на массу системы.
- Диск светодиодов с источником питания, который может дать быстрый и прямоугольных импульсов тока. Этот блок питания может управляться 5....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
В последние годы наблюдается взрыв популярности инструментов optogenetic в области нейронаук 6. В результате, становится все более важным снизить барьер входа для лабораторий, желающих, чтобы начать использовать эти новые инструменты. Здесь мы опишем, как проводить простую и низкой стоимостью модернизации и калибровки обычным патч-зажим установки, так что он может сделать полный оптическая стимуляция channelrhodopsin-экспрессирующих нейронов. В частности, мы применяем этот метод для исследования обонятельных .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нет конфликта интересов объявлены.
Благодарности
Эта работа была поддержана компания по страхованию жизни "AG2R-La-Mondiale», Школе нейронаук Парижской (ЕПС), Национальное агентство по La Recherche "ANR-09-NEUR-004" в рамках "ERA-NET NEURON "7РП программы Европейской комиссии и Пастера Foundation. Себастьян Вагнера была поддержана Letten Foundation.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Кетамин | Imalgène 1000 | 100 mg/ml | |
| Ксилазин | Rompun | 2% | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | S5886 | &nbps; |
| KCl | Sigma-Aldrich | P5405 | |
| MgSO4 | Sigma-Aldrich | M1880 | |
| NaHCO3 | Sigma-Aldrich | S5761 | |
| NaHPO4 | Sigma-Aldrich | S5011 | |
| Глюкоза | Sigma-Aldrich | G7021 | |
| CaCl2 | Sigma-Aldrich | C7902 | |
| Агароза | Sigma-Aldrich | A9539 | |
| Пипет-пуллер | Sutter Instrument Co. | P-97 | |
| Стеклянные капилляры | Harvard Apparatus | GC150T-10 | наруж. диам. 1.5 mm/внутр. диам. 1.17 mm |
| LED-матрица | Bridgelux | BXRA-C2000 | |
| Коллимирующая линза | Thorlabs Inc. | LEDC1 | диаметр луча 40 mm |
| Блок питания | A1W Electronik | HKO2800 | 2.8 amp |
| Оптический измеритель мощности | Thorlabs Inc. | PM 100 | |
| Радиатор | Thermaltake | A1838 | Silent Boost K8 |
| Вентилятор | Thermaltake | A1838 | Silent Boost K8 |
| Вибратом | Leica Microsystems | VT1200S |
Ссылки
- Nissant, A. Adult neurogenesis promotes synaptic plasticity in the olfactory bulb. Nature Neuroscience. 12, 728-730 (2009).
- Apicella, A. Pyramidal Cells in Piriform Cortex Receive Convergent Input from Distinct Olfactory Bulb Glomer....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
