Наш протокол свидетельствует о том, как влить несколько гелей белка на время переработки Invitrogen Nupage Novex кассеты minigel и недорогие материалы, приобретенные в магазине товаров для дома. Этот экономичный и упорядочить метод включает в себя способ хранения гели при температуре 4 ° С в течение нескольких недель. По повторное использование пластиковых кассет геля из имеющихся в продаже гели, лабораторий, которые работают часто гели белков может существенно сэкономить затраты и помочь окружающей среде.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Заливка и запуск Белки гель за счет повторного использования коммерческих Кассеты
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Оценка белков с использованием додецилсульфата натрия полиакриламидном геле (SDS-PAGE) анализ общих техника, используемая биохимии и молекулярной биологии исследователи 1-4. Для лабораторий, которые выполняют ежедневный анализ белков, стоимость коммерчески доступных полиакриламидном геле (~ $ 10/gel) может быть значительным с течением времени. Для снижения этой стоимости, некоторые исследователи готовят свои гели полиакриламида. Традиционные методы заливки этих гелей обычно используют специализированное оборудование и стеклянные пластины геля, который может быть дорогим и исключает многие заливки гелей и хранить их для дальнейшего использования. Кроме того, обработка стеклянных пластин во время чистки или гель заливка может привести к случайной поломки создании угрозы безопасности, которые могут препятствовать их использованию для студентов лабораторные занятия. Наш протокол свидетельствует о том, как влить несколько гелей белков одновременно по переработке Invitrogen Nupage Novex кассеты minigel и недорогой маterials приобрести в магазине товаров для дома. Этот экономичный и упорядочить метод включает в себя способ хранения гели при температуре 4 ° С в течение нескольких недель. По повторное использование пластиковых кассет геля из имеющихся в продаже гели, лабораторий, которые работают часто гели белков может существенно сэкономить затраты и помочь окружающей среде. Кроме того, пластиковые кассеты гель чрезвычайно устойчивы к разрушению, что делает их идеальными для студентов классах лаборатории.
Протокол
1. Подготовка кассеты
- Чистая передняя и задняя пластины использовали Invitrogen Nupage Novex minigel кассету или другие коммерческие кассеты minigel.
- Подготовка примерно 1-3 мл пластиковых эпоксидных и хорошо перемешать в соответствии с инструкциями производителя.
- Применение эпоксидных к внутренней кромке передней панели, где две тарелки будет вступать в контакт, когда кассета собирается.
- Вставьте кусок фильтровальной бумаги или картона через нижнюю щель задней панели при сборке кассеты для предотвращения чрезмерного эпоксидной от герметизации проема. Удалить фильтровальной бумаги, как только две пластины собираются.
- ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Электрофорез белков гель является незаменимым методом для большинства лабораторий молекулярной биологии. Коммерчески доступные minigels обеспечивают высокий уровень удобства, но может быть дорогостоящим. Здесь мы покажем, как повторное использование minigel кассет с популярной маркой коммерчески доступных minigels. Этот метод сохраняет удобен тем, что готовый источник гели, но на долю от стоимости имеющихся в продаже minigels. Ключевым шагом в этой процедуре применения необходимого количества эпоксидной полностью запеча.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нет конфликта интересов объявлены.
Благодарности
Авторы благодарят Медицинского института Говарда Хьюза для UF науки для жизни награду AH
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Название реагента | Компания | Номер по каталогу | Комментарии |
| Invitrogen Nupage Novex Minigel кассеты (1,0 мм) | Invitrogen | NC2010 | Выпускается в 2, 5, 10, 12, 15 и 2D скважин |
| Пластиковые эпоксидной | Локтайт | 108771 | |
| Изоленты | Скотч | ||
| 125 мл стороне руки колбу | Пирекс | 5360 | |
| 4X Трис-Base разрешающей гель буфер | 1,5 М Трис-основание рН 8,7 | ||
| акриламид | Fisher Scientific | 01065-500 | |
| Бис-акриламида | MP Biomedicals, Inc | 800173 | |
| 30,8% раствор акриламида | 30:0.8 акриламид: бис-акриламид в IRG-H 2 O | ||
| 10% APS | Fisher Scientific | BP179-25 | 0,1 г персульфата аммония в 1 мл IRG-H 2 O, готовят непосредственно перед употреблением |
| TEMED | Аркос Organics | 138450500 | |
| 1-бутанол насыщенный 1X буфере гель разрешающей | 5:02 1-бутанол в 1X буфере разрешающей гель | ||
| 4X Трис-Base концентрирующий гель буфер | 1,5 М Трис-основание рН 6,8 | ||
| Гель гребень | Invitrogen | NC3015 | 15 хорошо, 1.0 мм толщиной |
| Импульс Sealer | TEW Электрические отопительного оборудования | ||
| Термосвариваемые Чехол | Kapak / Scotchpak | 1 пинта размера (6,5 "х 8") | |
| Гель для хранения буфера | 1X концентрирующий гель буфера с 0,1% азида натрия | ||
| Novex SDS Трис-Глицин буфера образца (2X) | Invitrogen | LC2676 | |
| DVB-T | FisherBiotech | BP172-5 | |
| 10Х трис-буфера Gylcine Running | Invitrogen | LC2675 | 1 л 10X складе: 29,0 г трис-Base, 144,0 г глицина, 10,0 г SDS |
| XCell SureLock мини-Cell | Invitrogen | EI0001 | |
| Гель для ножей | Invitrogen | EI9010 | |
| SimplyBlue Безопасный пятна | Invitrogen | LC6065 |
Ссылки
- Laemmli, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 227, 680-685 (1970).
- Raymond, S., Weintraub, L. Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis. Science. 130, 711-711 (1959).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
