Протоколы для половых клеток и трансплантации xenografting ткани яичка описаны. Зародышевых клеток трансплантации приводит к донорам производных сперматогенез в яичках и получатель представляет собой функциональный анализ восстановления для идентификации сперматогониальные стволовых клеток (SSC). Ткани яичка xenografting воспроизводит развитие семенников и сперматогенез различных видов донора в реципиент мышей.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Зародышевых клеток и трансплантации тканей яичка Xenografting у мышей
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Метод трансплантации половых клеток был разработан доктором Ральфом Бринстером и его коллегами в Пенсильванском университете в 1994 году1,2. Эти новаторские исследования показали, что микроинъекция половых клеток из фертильных мышей-доноров в семенные канальцы бесплодных мышей-реципиентов приводит к сперматогенезу из клеток донора и выработке сперматозоидов животным-реципиентом2. Использование самцов-доноров, несущих ген бактериальной β-галактозидазы, позволило идентифицировать сперматогенез, происходящий из клеток донора, и передачу гаплотипа донора потомству от животных-реципиентов1. Удивительно, но после трансплантации в просвет семенных канальцев пересаженные половые клетки смогли переместиться из просвета к базальной мембране, где расположены сперматогонии3. Общепризнано, что только SSC способны колонизировать нишу и восстановить сперматогенез в семенниках реципиента. Таким образом, трансплантация половых клеток представляет собой функциональный подход к изучению ниши стволовых клеток в семенниках и характеристике предполагаемых сперматогониальных стволовых клеток. На сегодняшний день трансплантация половых клеток используется для выяснения основ биологии стволовых клеток, создания трансгенных животных посредством генетических манипуляций с половыми клетками перед трансплантацией4,5, изучения взаимодействия клеток Сертоли и половых клеток6,7, хоминга и колонизации SSC3,8, а также самообновления и дифференцировки SSC9,10.
Трансплантация половых клеток также возможна и у крупных видов11. В этих случаях основными областями применения являются сохранение фертильности, распространение элитной генетики в популяциях животных и создание трансгенных животных, поскольку изучение сперматогенеза и биологии SSC с помощью этого метода является более сложным с логистической точки зрения и более дорогостоящим, чем у грызунов. Трансплантация половых клеток крупных видов в семенные канальцы мышей приводит к колонизации донорских клеток и экспансии сперматогоний, но не к их полной дифференцировке, что, вероятно, обусловлено несовместимостью соматического компартмента реципиента с половыми клетками филогенетически отдаленных видов12. Альтернативным подходом является трансплантация половых клеток крупных видов вместе с окружающим их соматическим компартментом. В 2002 году мы впервые сообщили о том, что небольшие фрагменты ткани семенника недозрелых самцов, трансплантированные под кожу спины иммунодефицитных мышей, способны выживать и проходить полную стадию развития с выработкой сперматозоидов, способных к оплодотворению13. С тех пор было показано, что ксенотрансплантация ткани семенника успешно проводится у многих видов, и этот метод стал ценной альтернативой для изучения развития семенников и сперматогенеза крупных животных на мышах14.
Протокол
ЧАСТЬ А. трансплантации половых клеток у мышей
1. Подготовка получателей мышей
- Получатели должны быть терпимы иммунологически (или генетически соответствуют доноров или иммунной недостаточности) к клеткам донора яичка.
- Получатели должны быть либо естественным лишенный сперматогенеза (например, W / W у мышей) или обедненный эндогенных половых клеток. Истощение зародышевых клеток может быть достигнуто путем облучения или химиотерапии препаратами, такими как бусульфан. В этом протоколе описываются способ получения получателем мышей с бусульфана.
- Лечить получателей в 4-6 недельного возраста чер....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
1. Зародышевых клеток трансплантации
Зародышевых клеток трансплантация дает только функциональный анализ для однозначного подтверждения наличия сперматогониальные стволовых клеток (SSC) в клеточной популяции. Только ГНЦ может дома и колонизировать ниши SSC на базальной мембране и инициирует доноров производных сперматогенеза. Зародышевых клеток Трансплантация позволило изучать и манипулировать ГНЦ беспрецедентным образом. Техника была использована для получения трансгенных животных с помощью г.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нет конфликта интересов объявлены.
Благодарности
Работа в лаборатории авторов была поддержана Министерством сельского хозяйства США / CSREES / NRICGP (2007-35203-18213); NIH / NCRR (2 R01 RR17359-06), NIH / NIEHS (1 R21 ES014856-01A2) и Альберта инновационную - Решения здравоохранения.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Название реагента | Компания | Номер по каталогу | |
| Коллагеназы (тип IV) | Сигма | C5138 | |
| Трипсин-EDTA | Invitrogen | 25200-056 | |
| DNaseI | Сигма | DN25 | |
| DMEM | Invitrogen | 31053-028 | |
| Трипановый синие пятна | Invitrogen | 15250-061 | |
| Нейлоновый фильтр ячейки сетки | BD Biosciences | 352 340 (40 мкм) 352350 (70μm) | |
| Бусульфан | Сигма | B2635 | |
| Тонкие стены стеклянные капилляры | Инструмент Всемирной Precision | TW 100-3 | |
| BD intramedic plyethylene трубки (PE100) | BD | CA-63018-725 | |
| Ethicon 6-0 Шелковые шовные | Ethicon | 706G | |
| Рана клипы | BD | 427631 | |
| Sigmacote | Сигма | SL2 | |
| X-гал | Сигма | B4252 | |
| Ферроцианида калия | Сигма | P9387 | |
| Калий феррицианида | Сигма | P3667 | |
| Хлорид магния | Сигма | 208337 | |
| дезоксихолата натрия | Сигма | D6750 | |
| N, N-диметилформамид | Сигма | D4551 | |
| Igepal CA-630 | Сигма | 18896 |
Ссылки
- Brinster, R. L., Avarbock, M. R. Germline transmission of donor haplotype following spermatogonial transplantation. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (24), 11303-11303 (1994).
- Brinster, R. L., Zimmermann, J. W.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
