Методическая статья

Упрощенная Техника

20.9K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/3765

⸱

12 июня 2012 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Fondazione Banca Degli Occhi del Veneto O.N.L.U.S. , 2Telethon Institute for Genetics & Medicine (T.I.G.E.M.)

В этой статье

Краткое содержание

В статье описывается упрощенная техника акцизного роговицы и сетчатки потрошить тканей глазной шар трупа человека доноров. Техника, описанная здесь поможет акцизного хорошее качество ткани использовать для трансплантации, хирургическому или исследовательских целей, не повреждая другие ткани глазного шара.

Аннотация

Энуклеация — это процесс извлечения глазного яблока из трупа донора, при котором остальная часть яблока остается неповрежденной. Эксцизия представляет собой извлечение тканей глаза, особенно роговицы, путем ее отделения от глазного яблока. Эвисцерация — это процесс удаления внутренних структур, в данном случае сетчатки. Глазное яблоко состоит из роговицы, склеры, стекловидного тела, хрусталика, радужки, сетчатки, сосудистой оболочки, мышц и т. д. (Доп. Рисунок 1). При повреждении роговицы пациента ее необходимо удалить и пересадить здоровую с помощью кератопластических операций. Генетические заболевания или дефекты функции сетчатки могут привести к потере зрения. Глазные яблока человека могут использоваться для различных хирургических процедур, таких как создание банков глаз, трансплантация роговицы или склеры человека, а также для исследований тканей глаза. Однако доступно мало информации об эксцизии роговицы и сетчатки человека, вероятно, из-за ограниченного доступа к человеческим тканям. Большинство исследований, описывающих подобные процедуры, проводятся на животных моделях. Исследователи полагаются на доступность правильно препарированных и хорошо законсервированных тканей глаза для расширения знаний о развитии, гомеостазе и функциях человеческого глаза. Поскольку мы получаем большое количество глазных яблок, примерно 40% (Таблица 1>) из которых используются в исследовательских целях, мы имеем возможность проводить огромное количество экспериментов с этими тканями, вырабатывая методы их регулярной эксцизии и консервации.

Роговица представляет собой аваскулярную ткань, которая обеспечивает прохождение света на сетчатку, и для этой цели она всегда должна сохранять высокую степень прозрачности. В роговице область лимба, являющаяся резервуаром стволовых клеток, способствует восстановлению эпителиальных клеток и ограничивает разрастание конъюнктивы, поддерживая прозрачность и чистоту роговицы. Размер и толщина роговицы имеют решающее значение для четкости зрения, так как изменения любого из этих параметров могут привести к искаженному, нечеткому зрению. Роговица состоит из 5 слоев: а) эпителий, б) слой Боумена, в) строма, г) мембрана Десцеме и д) эндотелий. Все слои должны функционировать должным образом для обеспечения четкого зрения4,5,6. Хориоидея — это промежуточная оболочка между склерой и сетчаткой, ограниченная изнутри мембраной Бруха; она отвечает за кровоток в глазу. Хориоидея также помогает регулировать температуру и обеспечивает питание внешних слоев сетчатки5,6. Сетчатка представляет собой слой нервной ткани, покрывающий заднюю часть глазного яблока (Доп. Рисунок 1), и состоит из двух частей: фоторецепторной и нерецепторной. Сетчатка способствует приему света от роговицы и хрусталика и преобразует его в химическую энергию, которая затем передается в мозг с помощью зрительного нерва5,6.

Целью данной работы является предоставление протокола диссекции тканей роговицы и сетчатки из глазных яблок человека. Предотвращение перекрестного загрязнения прилегающими тканями и сохранение целостности РНК имеют первостепенное значение, поскольку такие ткани незаменимы для исследовательских целей, направленных на (i) характеристику транскриптома тканей глаза, (ii) выделение стволовых клеток для проектов в области регенеративной медицины и (iii) оценку гистологических различий между тканями здоровых и больных субъектов. В данной статье мы описываем метод, который используем в настоящее время для удаления роговицы, сосудистой оболочки и тканей сетчатки из глазного яблока. Здесь представлен подробный протокол диссекции глазного яблока человека и иссечения тканей роговицы и сетчатки. Сопровождающее видео поможет исследователям освоить подходящую методику получения ценных тканей человека, которые труднодоступны для регулярного сбора.

Протокол

1. В местах иссечения роговицы от глазных глобус

  1. Включите ламинарного потока воздуха шкаф примерно 15 минут перед использованием. Очистите капот ламинарного потока с использованием 70% изопропилового спирта. Положите на индивидуальную защитную одежду, таких как хирургические шапки и маски. Скраб для рук и предплечий и вытереть их насухо стерильной салфеткой. Носите стерильные перчатки и халат или рукава использованием асептических условиях.
  2. Настройка стерильной зоне, поставив стерильный лоток инструмент стерильно. Убедитесь, что инструменты стерильны. Откройте стерильный пакет инструментов и щелкнуть на поле стерильными избежать любого загрязнения.
  3. Поместите все стерильные материалы и инструменты (табл. 2), а также бутылки (банки глаз), содержащий глаз шары так, чтобы они примыкают к краю стерильной зоны для удобства использования.
  4. Этикетка бутылки с заранее подготовленного сохранение / носителе, как это указано в таблице 3 и поместитем на поверхности ламинарного потока воздуха капотом вместе с I-ПВП (поливинилпирролидон йода), тиосульфата натрия и стерильным физиологическим раствором PBS (фосфатный буфер солевом растворе).
  5. Позвольте глазные ткани и решений для достижения нормальной комнатной температуре, поскольку они хранятся в холодильниках при температуре 4 ° C. Избегайте повторных потепление / циклов охлаждения. Держите крышки решения и глаз банки с внутренней стороной вверх рядом с их банками.
  6. Удаление сетки и губки от глаз банке стерильным пинцетом. Погрузитесь мире в стерильный I-PVP 0,5% в течение 2 минут для очистки глазных глобусы. Поместите два пинцета на крышке стерильный лоток, вне стерильной зоны. Передача мира в тиосульфата натрия 0,1% в течение 1 минуты с помощью другой пары стерильных щипцов. Используя те же щипцы, передает земного шара, чтобы флакон, содержащий стерильный физиологический раствор (PBS) и оставить его, пока он работает. Повторите ту же процедуру для другого мира глазных от тон же донора.
  7. Рабочие под капотом поток воздуха ламинарным, обернуть земной шар стерильные марлевые (бандажи), оставляя роговицы и около 5 мм склеры с роговицей раскрыты. Глаза лампы можно просто держать в руке поддержания нормального давления. Ткань должна быть влажной в течение всего операция.
  8. Щипцы используются вместе с ножницами, чтобы удалить все возможные остатки конъюнктивы. Держите инструменты, используемые для этой операции отдельно от других инструментов. Используйте лезвие скальпеля для выполнения разреза склеры в 3-4 мм от лимба регионе, то расширить разрез на 360 °, не допуская к перфорации основного увеальной ткани или вызывать деформацию нормальной кривизны роговицы. Отрежьте четыре больших разрезов оставив четыре небольших недостатков избежать выделения стекловидного тела. Все четыре пробелы вырезаются обеспечение не удаление любых других тканей.
  9. Наличие небольшого склеры бляшки могут помешать резки, поэтому убедитесь, что компЛете склеры вырезание ножницами микрохирургии. Эта операция должна быть выполнена без повреждения сосудистой оболочки, сетчатки и стекловидного тела.
  10. Проверьте разрез чтобы убедиться в его полной. Если разрез был выполнен правильно Corneo-склеры обода придерживается цилиарного тела только в точке в соответствии с роговицы.
  11. Установить завернутый глазной шар вниз рядом с центром стерильной зоне. Завершите удаление роговицы с помощью щипцов для хранения склеры обода стационарных и рука используется для удаления тянуть цилиарного тела, сосудистую оболочку вниз и от склеры Corneo-кнопку.
  12. Аккуратно отделить оставшиеся спайки с Corneo-склеры кнопку. Ни вытащить Corneo-склеры край таким образом, что может привести к перекрестной роговицы напряжения, ни позволить ей бросить вниз на передней камере.
  13. Эндотелиальных плотность клеток роговицы проверяется с помощью гипотонического раствора и клетка смертность проверяется с помощью Trypсиняя окраска около 1 мин, и клетки, затем учитываются в оптический микроскоп и измеряется как клеток / мм 2. Передняя камера должна быть обращена к крышке, а задние приходится сталкиваться в нижней части чашки Петри. Эндотелиальные клетки плотности можно пересчитать вручную с помощью сетки в цель при увеличении 100х. Минимальная принято клеток для трансплантации в Италии составляет 2200 эндотелиальных клеток / мм 2.
  14. Передача Corneo-склеры обода использованием роговицы когтей на заранее подготовленные роговицы носителе сохраняется при комнатной температуре (комнатной температуры), как показано в таблице 3.
  15. Проверьте заднюю камеру для естественного хрусталика. Если склеры готово, удалите все остатки сосудистая оболочка глазного яблока и стекловидного тела с земной шар. Осторожно развернуть и вернуть оставшуюся заднюю часть с соответствующим банка глаз, с использованием асептических условиях. Повторите процедуру для других миру с помощью новых инструментов. Закрепите роговицы остроумиеч роговицы когтей и сохранить под носители (орган культуры) при 31 ° C. Вырезали роговицы, как показано на рисунке 1а, могут быть использованы для кератопластики или исследования.
  16. Утилизировать ненужных материалов и биологически опасных отходов в соответствующие мусорные баки. Очистите рабочую область после завершения работ с использованием 70% изопропиловый спирт спрей.
  17. Если после 28 дней роговица сохраняет все оценки параметров [такие, как морфология, клеток, прозрачности, толщины и микробиологии тестов - бактериальные и грибковые использовании инструмент Bactec 9240 (Becton Dickinson, Милан, Италия)], это могут быть доставлены в больницы использованием транспортной среды приведены в таблице 4. Роговицы должны быть удалены и помещены на хранение в транспортную среду в ламинарный шкаф воздушного потока.
  18. Как во время хранения, роговица становится более толстым, чем его обычный размер необходимых для трансплантации глаза банки используют де-набухание агентов уменьшить толщину. Мыиспользовать 6% декстрана T500, чтобы получить роговицы обратно в нормальный размер, в транспортной среды. Хотя 4-8% декстрана T500 может быть использован, 6% послужило для нас лучше. Это облегчает для хирургов пересадки роговицы, как только они получают его.

2. Потрошение сетчатки от глазных Globe после вырезания роговицы

  1. После удаления, роговицы выбран для трансплантации или исследования, основанные на морфологии и эндотелиальных клеток и плотность находится в хранении и сохранение среды при 31 ° C. Остальные глазного миру затем обрабатывается для дальнейшего использования, такие как изоляция склеры для хирургических целей, сетчатки для исследований и т.д.
  2. До удаления сетчатки, убедитесь, что глазные мире цела, и только роговица с частью склеры удаляется. Если желатиновых стекловидным телом является выделять из этого становится трудно удалить ткани сетчатки.
  3. Если донор находится ниже 65 лет, склерысохраняется при стерильной PBS для хирургических целей после серологического тестирования. В этом случае, склеры не вырезано, только в стекловидное тело удаляется, а все склеры сохраняется.
  4. Для удаления сетчатки, начните с небольшой разрез или разрез от роговицы сторону склеры движется в направлении зрительного нерва использованием стерильного пинцета и ножниц. Держите части склеры с помощью щипцов и вырезать ножницами прямо к зрительному нерву резка по частям избежать повреждения стекловидного тела.
  5. Хориоидеи таблички должны быть отделены от склеры, как они слиплись. Вырезать все склеры, чтобы разоблачить сосудистой ткани. После того, склера полностью вырезать, отделить склеры с остальными стекловидного тела за счет сокращения его рядом зрительного нерва. Весь шар стекловидного тела покрыта сосудистой будет видно, как показано на рисунке 2а.
  6. Использование двух стерильных щипцов удалите слой сосудистой оболочки осторожно поднять его с однимПара щипцов и удаления его с другими. Кроме того, сосудистого слоя можно удалить с помощью ножниц, но это в идеале должны избегать, так как это может привести к повреждению сетчатки. Удалите слой сосудистой оболочки частично и разрезать его, чтобы облегчить удаление.
  7. После того, сосудистое слой удаляется, прозрачный слой сетчатки будет хорошо видно, как показано на рисунке 2б. Сосудистого слоя мембраны Бруха интерьера, которые могут быть удалены, но это трудно определить ее невооруженным глазом.
  8. Кроме того, использование двух щипцы для удаления сетчатки слой, как показано на рисунке 2в. Легко выделить большое количество сетчатки, если вырезали около зрительного нерва. Все слои глаза можно теперь рассматривать как показано на рисунке 2-й.
  9. После того, ткани сетчатки была удалена, она может быть использована для различных целей и, следовательно, последующие шаги и условия, используемые для сохранения могут отличаться соответственно. Например,ткани сетчатки могут быть помещены в пробирки, содержащие РНК стабилизации реагенты (например, RNAlater) или лизис буфера (для экстракции РНК или ДНК), dispase / трипсина (для выделения клеток), крепежные решения (до вставлять тканей в парафин или октябре для иммуногистохимии).
  10. Очистить все рабочую зону и очистить территорию с использованием 70% изопропиловый спирт спрей.

3. Представитель Результаты

Corneo-склеры край, как показано на рисунке 1а правильно вырезали роговицы с необходимым количеством склеры обода и эндотелиальных морфологии, этот вид роговицы, как правило, используются для сквозной кератопластики. Если передняя стромы роговицы вырезали поврежден при наличии прозрачности, роговица может быть использован для эндотелиальной кератопластики / задние пластинчатые кератопластики (эндотелий с частью стромы). Принимая во внимание, если эндотелиальные слой поврежден или, если эндотелиальные клетки плотностью <2200 клеток / мм 2 (онаАлеан стандарт), роговицы могут быть использованы для передних кератопластика пластинчатые (эпителий с частью передней стромы). Если количество клеток эндотелия меньше, чем требуется, роговицы могут быть использованы для передних пластинчатые кератопластика или исследования в то время как, если роговица повреждена полностью, она может быть использована для исследования, как показано на рисунке 1б, 3б и 3в или выбросить. Ущерб может быть причиной неправильной ткани, до операции катаракты приводит к стромальные или десцеметовой эндотелиальных шрамов, развитию физической травмы в течение жизни и т.д. пациента Таким образом, возникает необходимость проверить каждую ткань с щелевой лампой, а затем под оптическим микроскопом штрафа шрамы / складки / отрядов. Роговицы, как правило, сохраняется при двух различных условиях, таких как органной культуры (около 31 ° C) обычно используется в европейских странах или гипотермия условиях (около 4 ° С) обычно используется в США. Мы используем органной культуры, поскольку это помогает восстанавливать плотинувозраста эпителиальные клетки, чтобы вновь оживить эндотелиальные клетки проверки с высоким время после смерти, срок хранения 4 недели, что дает достаточный окно для планирования операции, дает достаточно времени для микробиологических (бактерий и грибков) и серологическое тестирование и т.д. роговицы могут быть также сохранены в транспортной среде в течение 7 дней.

Склеры могут быть сокращены по частям обеспечения нежного удаления всех хориоидеи бляшек. Стекловидной жидкости могут выделять при зрительного нерва, сосудистого или сетчатки резко сократить, как показано на рисунке 4. Сетчатки, если вырезали для анализа РНК должна быть сохранена в RNAlater как только ткань вырезали. Обычно 1X1 см от сосудистой оболочки и сетчатки слой вырезали и, продержав его в RNAlater в течение 24 часов при температуре 4 ° С сохраняется при -80 ° С в свежих труб Эппендорф (безопасный замок труб, 2 мл) до использования или отгружено с сухим льда. Ткани сетчатки должны быть изъяты при помощи двух пинцетов около зрительного нерва от диафрагмыили ресничного края, чтобы избежать загрязнения с другими пигментированных структур и должны быть переданы в сохранении контейнер сразу же, как РНК становится неустойчивым при получении сетчатки.

figure-protocol-1
Рисунок 1 Сравнение между хорошим и плохим качеством роговицы.) Правильно вырезали роговицы. Такая роговица обычно сохраняется при органной культуры в течение 4 недель. Микробиологические (с помощью инструмента Bactec 9240) и морфологических (окрашивание клеток с трипановым синим для мобильных определение смертности и наблюдения клеток под оптическим микроскопом с увеличением 100х), осмотр проводится до его транспортировки в больницу (рис. 3а), б) изогнутые роговицы , которые в конечном итоге приводит к отторжения трансплантата из-за складок высокий Десцеметова и высокой повреждение эндотелия клетки исследовали с помощью микроскопа щелевой лампы. Такая роговица обычно используется для разрешенияearch или удаляется.

figure-protocol-2
Рисунок 2. Метод, используемый для обеспечения точного иссечения ткани сетчатки.) Разбор склеры из глазного миру использованием 24mm лезвия 95 мм изогнутые или тупым концом стерильными ножницами и 100 мм 11x2 правит 0,70 мм зубов стерильными щипцами. Склеры должны быть сокращены, держа одну сторону с щипцы резки его прямо к зрительному нерву помощью ножниц. Сосудистого слоя, теперь легко увидеть, б) с помощью двух 100 мм 11x2 правит 0,70 мм зубы стерильный пинцет, сосудистая оболочка удаляется разрывая его на части, которая раскрывает основные прозрачный слой сетчатки, в) прозрачный слой сетчатки вырезали очень осторожно рядом зрительного нерва без выделения стекловидной жидкости с использованием тех же пинцетом. И щипцы должны держать обе стороны сетчатки и ткани должны быть удалены осторожно Startinг около зрительного нерва движется к роговице, чтобы получить хорошее количество ткани сетчатки. Ткань может быть разрезана на различные размеры и используются для анализа экспериментов, г) различные слои роговицы глаза после удаления можно посмотреть на этом рисунке. Сосудистое тело сначала удаляется затем сетчатки без повреждения других частей глаза.

figure-protocol-3
Рисунок 3. Сравнение различных типов плотности клеток и морфология рассматривается под 100X увеличение оптического микроскопа.) Хорошо эндотелиальной клеточной плотности (> 2200 клеток / мм 2) и морфологии (менее полиморфизм, низкая дегенерации, дистрофии и не 0% смертность) в роговице, которая подходит для трансплантации, б) Бедный эндотелиальной клеточной плотности (около 1200 - 1400 клеток / мм 2) и морфологии (очень высокий полиморфизм и вырождениечество клеток), а примерно 30-40% общей смертности наблюдаются после окрашивания трипанового синий, в) часть эндотелиальных клеток повреждены из-за отряд эндотелиальных лист при получении от глазной роговицы миру. Это подтверждают наблюдения смертность клеток в регионе окрашенных по трипанового синий, г) складки Десцеметова образуются в результате неправильного обращения с роговицы изгиб, создавая поперечное напряжение роговицы, используя инструменты, активно и т.д. во время удаления. На рисунке показана толстая развитых ятрогенные складки находится между периферией и оптической зоны роговицы.

figure-protocol-4
Рисунок 4. Повреждение сосудистой оболочки и сетчатки тканей в то время как вырезанием роговицы в конечном итоге приводит к выделению стекловидной жидкостью. Сетчатка получает вовлечены в стекловидное тело затрудняет акцизного хорошее качество ткани шthout загрязнения.

figure-protocol-5
Таблица 1. Резюме спектр деятельности, осуществляемой с использованием человеческих глобусы глазные в течение 2009 и 2010 в Fondazione Banca дельи Occhi (Венеция, Италия). Примерно 60% тканей для трансплантации, в результате чего большое количество глазных шаров (около 40%) для научных и медицинских исследований.

figure-protocol-6
Дополнительные рисунке 1. Анатомия человеческого глаза 5. Различные части человеческого глаза указывается в эту цифру, используемых для контроля за точное положение ткани.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

И, правильное удаление и надлежащую сохранность роговицы и сетчатки тканей являются критическими как незначительные дефекты, такие как повреждение эндотелия или большим количеством складок Десцеметова может привести к недостаточности трансплантата роговицы в то время как температура изменения или неправильного обращения может поставить под угрозу целостность сетчатки тканей. Целью данной статьи является показать, как роговицы и сетчатки тканей может быть выделен оптимально, не вызывая повреждения или изменения, которые ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют конфликта интересов.

Благодарности

Эта работа была поддержана частично за счет грантов Regione Венето (Ricerca Sanitaria Finalizzata n.292/2008 и Ricerca Sanitaria Finalizzata 2009). Авторы выражают благодарность д-р C. Griffoni на 2009/2010 сводные данные по использованию человеческих глобусы глаз.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Материалы для удаления роговицы и сетчатки.

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Описание товара Размеры Компания / Институт
Охраняемая одноразовый скальпель Размер лезвия 15 Swann-Morton
Стерильные бинты 5 см х 5 см, 8 слоистые, 5 шт Artsana
Стерильные одноразовые медицинские полотенце 35 X 50 см U.Jet
Стерильные ножницы Лезвия 24 мм / длина. 95 мм изогнутые, тупые e.janach
Стерильные пинцеты Нержавеющая сталь -100 мм 11 X 2 правит 0,70 мм зубы e.janach
Роговицы когтей - одноразовые медицинские устройства NIIOS (Hippocratech)
Подготовка
PBS 100 мл PBS [10 раз] в 900 мл д / ш (дистиллированная вода) Sigma-Aldrich
Na-тиосульфата 1 г Na-тиосульфата в 1 л PBS [1x] Sigma-Aldrich
I-PVP 5 г I-PVP в 1 л D / W Sigma-Aldrich

Таблица 2. Таблице описаны материалы, используемые для удаления роговицы и сетчатки и компании они получены от.

Материалы для носителя (2000 мл).

Компоненты Поставщик Номер по каталогу Концентрация Количество
MEM(1X) жидкости Invitrogen 32360-034 1900 мл
Натрия пируват Invitrogen 11360-039 1 мм (10 мл / л) 20 мл
L-глютамин Invitrogen 25030-032 2 мм (10 мл / л) 20 мл
Антибиотикам / противогрибковым Sigma-Aldrich A5955-20ML 10 мл / л 20 мл
Новорожденные телячьей сыворотки Invitrogen 26010-74 2% (20 мл / л) 40 мл

Таблица 3. Материалы для носителя.

Подготовка носителя

Добавить все ингредиенты при помощи специальных концентрациях, как указано выше в банке и хорошо перемешать. Фильтр ихиспользование размером пор 0,2 мкм фильтр (Millipore, Милан, Италия) с помощью перистальтического насоса. Сохранение среды в бутылках при комнатной температуре.

Материалы для транспортной среды (2000 мл).

Компоненты Поставщик Номер по каталогу Концентрация Количество
MEM (1X) жидкости Invitrogen 32360-034 1800 мл
Натрия пируват Invitrogen 11360-039 1 мм (10 мл / л) 20 мл
L-глютамин Invitrogen 25030-032 2 мм (10 мл / л) 20 мл
Новорожденные телячьей сыворотки Invitrogen 26010-74 2% (20 мл / л) 40 мл
Декстрана T500 Pharmacosmos 551005004007 6% (60 г / л) 120 г / л

Таблица 4. Материал для транспортной среды.

Подготовка транспортной среды

Добавить декстран 6% в ~ 1,5 литра MEM и оставить его на ночь. Добавить остальные ингредиенты в средствах массовой информации и с помощью расширения 0,2 мкм фильтр (Millipore, Милан, Италия) с помощью вакуумного насоса. Сохранение среды в бутылках при комнатной температуре.

Ссылки

  1. Fay, A. Diseases of the visual system. Cecil Medicine. Goldman, L., Ausiello, D. , 23rd ed, Saunders Elsevier. Philadelphia, Pa. (2007).
  2. Parekh, M., Megaw, R., Ray-Chaudhuri, A., Ahmad, S. Patents in Limbal Stem Cell Biology. Recent patents on Regenerative Medicine. 1, 207-212 (2011).
  3. Pharm, U. S. The Eye: The physiology of human perception. Britannica educational publishing. 36, 19-27 (2011).
  4. Lang, G. Ophthalmology: A pocket textbook atlas. , 2nd Edition, 115-117 Forthcoming.
  5. Liesbeth, P. els Organ Culture: The method of choice for preservation of human donor corneas. Br. J. Ophthalmol. 81, 523-525 (1997).
  6. Meyer, J. S., Howden, S. E., Wallace, K. A., Verhoeven, A. D., Wright, L. S., Capowski, E. E., Pinilla, I., Martin, J. M., Tian, S., Stewart, R., Pattnaik, B., Thomson, J., Gamm, D. M. Optic vesicle-like structures derived from human pluripotent stem cells facilitate a customized approach to retinal disease treatment. Stem Cells. , (2011).
  7. Trifunovic, D., Karali, M., Camposampiero, D., Ponzin, D., Banfi, S., Marigo, V. A high-resolution RNA expression atlas of retinitis pigmentosa genes in human and mouse retinas. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 2330-2336 (2008).
  8. Mora, P., Montanini, L., Ferrari, S. Retina. 30, 1555(2010).
  9. Claybon, A., Bishop, A. J. R. Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium. J. Vis. Exp. (48), e2563(2011).
  10. Skeie, J. M., Tsang, S. H., Mahajan, V. B. Evisceration of Mouse Vitreous and Retina for Proteomic Analyses. J. Vis. Exp. (50), e2795(2011).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

RNA Later

Похожие статьи