$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Содержание холестерина в клетках должно поддерживаться в очень жестких пределах, слишком большое или слишком малое содержание холестерина в клетке приводит к нарушению клеточных мембран, апоптозу и некрозу 1. Клетки могут получать холестерин из внутриклеточного синтеза и из липопротеинов плазмы, оба источника достаточны для полного удовлетворения потребностей клеток в холестерине. Процессы синтеза и поглощения холестерина жестко регулируются, дефицит холестерина встречается редко 2. Избыток холестерина является более распространенной проблемой 3. За исключением гепатоцитов и в некоторой степени адренокортикальных клеток, клетки не способны расщеплять холестерин. У клеток есть два варианта снижения содержания холестерина: преобразование холестерина в холестериловые эфиры, вариант с ограниченной способностью, поскольку перегрузка клеток холестериновыми эфирами также токсичен, и отток холестерина, вариант с потенциально неограниченной емкостью. Отток холестерина – это специфический процесс, который регулируется рядом внутриклеточных транспортеров, таких как АТФ-связывающие кассетные транспортеры белки A1 (ABCA1) и G1 (ABCG1) и рецепторы-поглотители типа B1. Естественным акцептором холестерина в плазме являются липопротеины высокой плотности (ЛПВП) и аполипопротеины А-I.
Анализ оттока холестерина предназначен для количественной оценки скорости оттока холестерина из культивируемых клеток. Он измеряет способность клеток поддерживать отток холестерина и/или способность акцепторов плазмы воспринимать холестерин, высвобождаемый клетками. Анализ состоит из следующих этапов. Шаг 1: мечение клеточного холестерина путем добавления меченого холестерина в сывороткосодержащую среду и инкубации с клетками в течение 24-48 часов. Этот этап может сочетаться с нагрузкой клеток холестерином. Шаг 2: инкубация клеток в бессывороточной среде для выравнивания меченого холестерина среди всех внутриклеточных пулов холестерина. Эта стадия может сочетаться с активацией клеточных переносчиков холестерина. Шаг 3: инкубация клеток с внеклеточным акцептором и количественная оценка движения меченого холестерина от клеток к акцептору. Если предшественники холестерина использовались для маркировки вновь синтезированного холестерина, может потребоваться четвертый этап – очистка холестерина.
Анализ предоставляет следующую информацию: (i) как конкретное лечение (мутация, нокдаун, сверхэкспрессия или лечение) влияет на способность клетки к эффлюксу холестерина и (ii) как болезнь или лечение влияют на способность акцепторов плазмы воспринимать холестерин. Этот метод часто используется в контексте сердечно-сосудистых исследований, метаболических и нейродегенеративных расстройств, инфекционных и репродуктивных заболеваний.