Высокая пропускная способность экспрессии белков генератора с использованием платформы Микрофлюидных

Summary

Мы представляем микрофлюидных подход к экспрессии белка массивов. Устройство состоит из тысяч реакционных камерах контролируется микро-механических клапанов. Микрофлюидных устройство соединяется с микрочипов печатных библиотеки генов. Эти гены затем расшифрованы и переведены на-чипе, в результате чего белок массива готово для экспериментального использования.

Abstract

Быстро растущая областях, таких как биология систем, требующих разработки и внедрения новых технологий, обеспечивая высокую пропускную способность и высокую точность измерений больших систем. Microfluidics обещает выполнить многие из этих требований, таких как выполнение высокой пропускной экспериментов скрининга на-чипе, охватывающий биохимических, биофизических и клеточных анализов ^1. С первых дней устройства микрофлюидики, это поле резко эволюционировали, что приводит к развитию микрофлюидных масштабная интеграция ^2,3. Эта технология позволяет интегрировать тысяч микромеханических клапанов на одном устройстве с почтовую размера следа (рис. 1). Мы разработали высокой пропускной микрофлюидных платформой для создания в пробирке экспрессии белка массива (рис. 2) имени PING (белковые взаимодействия сети Generator). Эти массивы могут служить в качестве шаблона для многих экспериментовтаких как белок-белковых ^4, белка-РНК ⁵ или белок-ДНК ⁶ взаимодействий.

Устройство состоит из тысяч реакционных камер, которые индивидуально запрограммировать с помощью microarrayer. Выравнивание этих печатных микрочипы для устройств микрофлюидики программ каждой камеры с одного места ликвидации возможного загрязнения или перекрестной реактивности Кроме того, создание микрочипов с использованием стандартных методов микрочипов кровянистые выделения также очень модульной, что позволяет выстроив белков ^{7, ДНК-8,} малых молекул, и даже коллоидные суспензии. Потенциальное воздействие на микрофлюидики биологических наук является значительным. Число микрофлюидики на основе анализа уже представили новые идеи в структуре и функции биологических систем, и поле микрофлюидики будет продолжать влиять на биологию.

Protocol

1. Устройство изготовления

1. Приобретенные DTPA-D SU-8 формы контроля и SPR220-7 потоке формы из Стэнфордского Microfluidics Foundry ( www.stanford.edu / группы / литейный ).
2. Expose силиконовые формы для хлортриметилсилана (TMCS) паром в течение 10 мин для содействия эластомер-релиз после выпечки шаги ^9.
3. Приготовить смесь из силиконовой основе эластомера и отвердителя (хорошо перемешать) в двух различных соотношениях 5:1 и 20:1 для контроля и поток форм, соответственно. Различные соотношения, необходимые для правильного склеивания нескольких слоев.
4. За....

Discussion

В этой статье мы представляем метод для генерации белка массивов в высокой пропускной способности, используя микрофлюидных платформы. Массив поколения на основе микрочипов печати ДНК шаблоны и в пробирке экспрессии белка с ДНК в микрофлюидных устройства.

Наш роман микрофлюидных платформа имеет несколько важных преимуществ по сравнению используемых в настоящее время методов, которые делают его перспективным и общий инструмент для протеомики. Одним из преимуществ является с мембраносв.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Реагент / Оборудование	Компания	Номер в каталоге
PDMS-Sylgard 184	Dow Corning США	ESSEX-DC
Хлортриметилсилан (TMCS	Sigma-Aldrich	C72854
С эпоксидным покрытием стеклянных подложках	CEL Associates США	VEPO-25C
Поли гликолевая этилена (PEG)	Sigma-Aldrich	81260
D-трегалозы дигидрат	Sigma-Aldrich	T9531
Биотинилированного-BSA	Проколоть	PIR-29130
Neutravidin	Проколоть	31050
пента-His-биотин	Qiagen	34440
Hepes	Биологические Industries	03-025-1B
TNT-T7	Promega	L5540
C-Myc антитела Cy3	Sigma-Aldrich
Блок управления	Стэнфордский Microfluidics Литейное
Плесень	Стэнфордский Microfluidics Литейное
Pin	Новая Англия трубочки корпорации
Tygon microbore труб	Tygon	S-54-HL
Microarrayer	Bio Robotics	Microgrid 610
Силиконовые контакты	Параллельно Synдиссертация	SMT-S75