Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Подготовка миелоидного Производные супрессоров (MDSC) от наивного и опухоли поджелудочной железы мышей использованием проточной цитометрии и автоматизированных магнитных активированный сортировки клеток (AutoMACS)

25.8K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/3875

⸱

18 июня 2012 г.

 ,  ,  , 
1Department of Molecular Medicine, University of South Florida Morsani College of Medicine

В этой статье

Краткое содержание

Это быстрый и всеобъемлющий метод иммунофенотипирования миелоидного Производные супрессоров (MDSC) и обогащению Gr-1 + Лейкоцитов из селезенки мышей. Этот метод использует проточной цитометрии и сортировки клеток AutoMACS обогатить жизнеспособных Gr-1 + Лейкоцитов до FACS сортировки MDSC для использования В естественных условиях И В пробирке Анализ.

Аннотация

MDSC представляют собой гетерогенную популяцию незрелых макрофагов, дендритных клеток и гранулоцитов, которые накапливаются в лимфоидных органах при патологических состояниях, включая паразитарные инфекции, воспаление, травматический стресс, реакцию «трансплантат против хозяина», сахарный диабет и рак1-7. У мышей MDSC экспрессируют поверхностные антигены Mac-1 (CD11b) и Gr-1 (Ly6G и Ly6C)7. Важно отметить, что MDSC подробно изучены на различных моделях опухоленосителей, где они значительно экспансированы и подавляют противоопухолевый иммунный ответ по сравнению с наивными особями7-10. Однако, в зависимости от патологического состояния, существуют различные субпопуляции MDSC с разными механизмами и мишенями супрессии11,12. Таким образом, разработка эффективных методов выделения жизнеспособных популяций MDSC имеет важное значение для выяснения их различных молекулярных механизмов подавления in vitro и in vivo.

Недавно группа Гансаха сообщила об экспансии MDSC в мышиной модели рака поджелудочной железы. Наши MDSC из опухоленосящих животных демонстрируют нарушение гомеостаза и повышенную супрессорную функцию по сравнению с наивными MDSC 13. Процентное содержание MDSC в лимфоидных органах наивных мышей значительно ниже, чем у опухоленосящих. Это серьезное ограничение, которое часто препятствует точному сравнительному анализу данных MDSC. Следовательно, обогащение Gr-1+ лейкоцитов из наивных мышей перед флуоресцентной сортировкой клеток (FACS) повышает чистоту, жизнеспособность и значительно сокращает время сортировки. Однако обогащение Gr-1+ лейкоцитов из опухоленосящих мышей является опциональным, так как их количество достаточно для быстрой сортировки методом FACS. Таким образом, в данном протоколе мы описываем высокоэффективный метод иммунофенотипирования MDSC и обогащения Gr-1+ лейкоцитов из селезёнок наивных мышей для своевременной сортировки MDSC. Иммунокомпетентным мышам C57BL/6 подкожно вводят мышиные клетки Panc02, в то время как наивные мыши получают 1XPBS. Примерно через 30 дней после инокуляции селезёнки извлекают и перерабатывают в одноклеточные суспензии с использованием сита для диссоциации клеток. Затем проводят лизис эритроцитов (RBC) в спленоцитах, и аликвоту этих лейкоцитов окрашивают антителами, конъюгированными с флуорохромом, против Mac-1 и Gr-1 для определения процента MDSC методом проточной цитометрии. В параллельном эксперименте все лейкоциты наивных мышей окрашивают конъюгированными с флуорохромом антителами Gr-1, инкубируют с PE-MicroBeads и проводят положительную селекцию с помощью автоматического сепаратора для магнитной сортировки клеток (autoMACS) Pro Separator. Затем аликвоту Gr-1+ лейкоцитов окрашивают антителами Mac-1 для выявления увеличения процента MDSC с помощью проточной цитометрии. Теперь эти обогащенные Gr-1+ лейкоциты готовы к сортировке MDSC методом FACS для последующего сравнительного анализа (наивные против опухоленосящих) в анализах in vivo и in vitro.

Протокол

Перед началом, подготовить следующие решения:

3% Окрашивание Media (SM):

-3% Эмбриональной телячьей сыворотки (FBS) в 1X фосфатного буфера солевым раствором (PBS)

MACS буфера (МБ):

- 0,5% альбумина из бычьей сыворотки (BSA) в 1XPBS

1. Урожай из селезенки мышей

  1. Подкожно вводят 6-8 недельного возраста C57BL / 6 (Харлан) с 1,5 х 10 5 клеток мышиной Panc02 приостановлены в 100 мкл 1x PBS (опухоль, туберкулез). Контрольные мыши (наивно) получают 100 мкл 1XPBS.
  2. Приблизительно 4 недели после инъекции, усыпить мышей углерода удушья газом.
  3. Урожай из селезенки мышей тупой диссекции с помощью щипцов и ножниц, то весят использованием баланса. Место селезенки в отдельных, обозначенных 50 мл конические пробирки, содержащие 1 х PBS.

2. Создание единой клеток Suspensioп Лейкоциты из селезенки

Все процедуры должны выполняться в стерильных условиях под биологической безопасности Гуд и клеток и антител держится на льду.

  1. Соберите клеточная диссоциация сито, вставив сито в открытии чашку ко дну. Затем вставьте стопорное кольцо в резьбовое области с прорезями вверх и использовать кольцо ключ для затяжки стопорного кольца, тем самым удерживая экран на месте. Поместите собранный сито в чашку Петри, содержащую 10 мл 1 х PBS.
  2. Бассейн селезенки и пестик использование стекла для измельчения селезенки с сеткой ячейки сита и диссоциации в чашке Петри. Повторите для каждой группы мышей.
  3. Фильтры клеточной суспензии в 50 мл коническую трубку использованием 70 мкм фильтр клетке и 5 мл серологические пипетки. Центрифуга при 12000 оборотов в минуту (250-300 мкг) в течение 5 мин.
  4. Удалить супернатант и ресуспендируют осадок в 5 мл 1 х лизиса буфера в селезенке. Внесите вверх и вниз энергично. Инкубируйте при комнатной температуре в течение 5 мин. Остановить реакцию, добавив 20 мл 1 х PBS. Внесите вверх и вниз энергично. Центрифуга при 12000 оборотов в минуту (250-300 мкг) в течение 5 мин.
  5. Удалить супернатант и ресуспендируют осадок в 20 мл стерильной 1 х PBS. Внесите вверх и вниз энергично.
  6. Граф клеток с использованием трипанового синего и hemacytometer и ресуспендируют в нужной концентрации в 3% SM, так что 50 мкл эквивалентно 5x10 5-1x10 6 клеток (1х10 7 клеток / мл - 2х10 7 клеток / мл).

3. Cell-поверхность окрашивания / Иммунофенотипирование из MDSC использованием проточной цитометрии

  1. Этикетка лунки 96-луночного В нижней панели для управления и опытных образцов и одного пятна на компенсацию управления (нет пятен, NS, Mac-1-FITC, Gr-1 БТР и DAPI).
  2. Добавить 5x10 5-1x10 6 клеток, эквивалентную 50 мкл / лунку спленоцитов в свои скважины в 96-и V-дно тарелки. Центрифугироватьпластины при 12000 оборотов в минуту (250-300 мкг) в течение 5 мин.
  3. Подготовить «Мастер Mix" (ММ) Мышь BD Fc Block (Крыса анти-мышиных моноклональных антител CD16/32) разводят в 3% SM, в 1,5 мл микроцентрифужных трубы на льду. В качестве отправной точки используется 1 мкг Fc Блока в 3% СМ для конечного объема 50 мкл, в каждую лунку.
  4. Осторожно удалите супернатант из каждой скважины из 96-и V-нижней пластины быстро обращения пластинку снова и обратно, за контейнер для отходов или раковины без разрушения клетки гранулы.
  5. Vortex, кратко центрифуги Fc Блок ММ в течение 5 секунд и добавить 50 мкл для всех гранул в 96-и V-дно тарелки. Хорошо перемешать, осторожно пипеткой вверх и вниз, оставляя образцы в скважинах. Инкубируйте пластины в течение 15 минут в темноте на льду. Центрифуга пластины при 12000 оборотов в минуту (250-300 мкг) в течение 5 мин.
  6. Подготовить «Мастер Mix" (ММ) флуорохромом конъюгированных антител разводят в 3% SM в 1,5 мл трубки микроцентрифужных на льду, в то время как образцы с инкубации Блок Fc. Антитела должна подбиратьсядля определения оптимального разведения для окрашивания процедур. В качестве отправной точки, объединить 1:25 разбавления Mac-1-FITC и 1:20 разбавления Gr-1-APC в 3% СМ для конечного объема 50 мкл, в лунки.
  7. Осторожно удалите супернатант из каждой скважины из 96-и V-вниз, как описано выше.
  8. Vortex, кратко центрифуги ММ флуоресцентных антител, конъюгированных окрашивания в течение 5 секунд и добавить 50 мкл до контрольной и экспериментальной гранул. Хорошо перемешать, осторожно пипеткой вверх и вниз. Для одного пятна компенсаций, добавить 1:25 разбавления Mac-1-FITC, 1:20 разбавления Gr-1 БТР и 75 нг / мл DAPI, в 3% СМ для конечного объема 50 мкл на лунку их соответствующие лунки. Добавить 50 мл 3% SM к незапятнанным хорошо (нет пятен). Хорошо перемешать и инкубировать клетки в 96-и V-нижнюю пластину в течение 30 минут в темноте на льду.
  9. Этикетка FACS труб (5 мл, 12 мм х 75 мм полистирола труб с круглым дном), чтобы соответствовать в каждую лунку в 96-и V-дно тарелки. Добавить 200 мкл 3% SM каждого FACSтрубы.
  10. Центрифуга пластины при 12000 оборотов в минуту (250-300 мкг) в течение 5 минут и удалить супернатантах. Вымойте гранул путем добавления 100 мкл 3% SM каждой гранулы и хорошо перемешать, осторожно пипеткой вверх и вниз. Центрифуга пластины при 12000 оборотов в минуту (250-300 мкг) в течение 5 мин. Повторите шаг вымыть еще раз.
  11. Осторожно удалите супернатант из каждой скважины из 96-и V-вниз, как описано выше. Ресуспендируйте каждый шарик в 100 мкл 3% СМ и хорошо перемешать.
  12. Передача 100 мкл ресуспендировали гранул из каждой лунки 96-и V-нижнюю пластину к их соответственно помечены трубки FACS.
  13. До Проточная цитометрия анализ, добавить 75 нг / мл DAPI контролировать и опытных образцов и DAPI одного пятна контроль компенсации.
  14. Выполните проточной цитометрии приобретения данных MDSC проценты. Выполните компенсацию с использованием отрицательной (не пятна контроля) и одного положительного контроля. Настройка точки сюжета, который отображает вперед (FSC) в зависимости от стороны рассеяния (SSC) в логарифмической шкале, так что лейкоцитов населенияинтерес может быть идентифицирован. Нарисуйте большой ворот на все лейкоциты, кроме мусора и комков с низким вперед и стороны разбегаются. Из этого родители ворот, создать новый сюжет точки, который отображает SSC против DAPI и ворота на DAPI-(живой) клеток. Выберите этот недавно закрытого населения и создание точки сюжета, который отображает Mac-1 по сравнению с Gr-1 и ворота на двойной положительный (Mac-1 + Gr-1 +) MDSC.

4. Магнитное обогащение Gr-1 + Лейкоциты

  1. Алиготе 1x10 7 оставшихся неокрашенных лейкоцитов в соответствующей маркировкой FACS труб и центрифуги при 12000 оборотов в минуту (250-300 мкг) в течение 5 мин.
  2. Подготовить ММ Gr-1-PE антител в 1,5 мл микроцентрифужных трубку. До 10 7 клеток, используют разведение 1:10 Gr-1-PE антитела в 50 мкл Мб, в образце. Для большего количества клеток, расширению объемов соответственно. Кратко центрифуги в течение 5 секунд, добавить в лейкоцитах в трубах FACS и инкубировать в течение 15 мин при 4 ° С в темноте.
  3. Добавить 2 мл Мб FACS трубы, центрифуги при 12000 оборотов в минуту (250-300 мкг) в течение 5 мин и супернатант отказаться.
  4. Подготовить ММ Anti-PE микрошариков в 1,5 мл микроцентрифужных трубку. До 10 7 клеток, используют разведение 1:4 анти-PE микрошариков в 200 мкл Мб, в образце. Для большего количества клеток, расширению объемов соответственно. Кратко центрифуги в течение 5 секунд, добавить в лейкоцитах в трубах FACS и инкубировать в течение 15 мин при 4 ° С в темноте.
  5. Добавить 2 мл Мб FACS трубы, центрифуги при 12000 оборотов в минуту (250-300 мкг) в течение 5 мин и супернатант отказаться. Ресуспендируют осадок в 3 мл СО. Фильтрация через 70 мкм фильтр в новый, помеченный 50 мл коническую трубку.
  6. Подготовка и премьер-Авто MACS Pro сепаратор. Refill все бутылки с соответствующими решениями и пустые бутыли с отходами, в случае необходимости. Включите инструмент и рассмотрим то состояние жидкости контейнеров и столбца (ы) после инициализации. Все символы должны быть зеленого цвета. В меню выберите пункт "Разделение" из верхнегоменю, затем "Промыть Now" из нижнего меню. Выберите "Полоскание" из всплывающего вариант, затем "Выполнить", чтобы начать процесс грунтования. После грунтовки процесс успешно завершен, прибор будет показывать, что он "готов на разделение" по статусу меню.
  7. Выберите подходящий охлажденной стойки трубы для труб размеры и место 50 мл коническую трубку с магнитным меченых клеток в строке, 50 мл коническую трубку для отрицательных сбор фракции в строке B и 15 мл коническую трубку для положительных сбор фракции в строке C.
  8. Выберите "POSSEL_S" ячейки разделение программы на положительный выбор меченых клеток-мишеней в чувствительный режим образца. Магнитное меченых клеток цель сохраняется в столбце автоматов; немеченого клетки попадают в отрицательную пробирки часть в строке B. На автоматизированных опровержение магнита, меченые клетки-мишени будет выпущен в положительную пробирки в строке C трубки стойку.

5. После сортировки Анализ Gr-1 + Лейкоциты Обогащенный

  1. Пересчет Gr-1 + и Гр-1 - фракции с использованием трипанового синего и hemacytometer. Ресуспендирования клеток в нужной концентрации в 3% окрашивания средних, так что 50 мкл эквивалентно 5x10 5-1x10 6 клеток (1х10 7 клеток / мл - 2х10 7 клеток / мл) и перенести 50 мкл соответственно помечены FACS труб.
  2. Подготовить ММ Mac-1 только в разведении 1:25 в 3% СМ для конечного объема 50 мкл на пробу. Пятно клетки и подготовить одного пятна компенсаций Gr-PE, Mac-1 FITC и DAPI для анализа потока цитометрии. Добавить 200 мкл 3% СМ и DAPI жизнеспособность красителя, как описано выше.
  3. Выполните проточной цитометрии сбора данных для определения Gr-1 + и Гр-1 - процент и также сравнить MDSC процентов пред-и пост-autoMACS обогащения.

6. Представитель Результаты

Здесь мы показываем, т epresentative результаты autoMACS обогащения Gr-1 + лейкоцитов из объединения, наивно селезенки для последующей сортировкой FACS MDSC (рис. 1). 1x10 6 лейкоцитов наивно окрашивали Mac-1-FITC и Gr-1-APC антитела для выявления MDSC процент использования инструмента BD LSRII до сортировки autoMACS. 1x10 7 наивных лейкоцитов затем окрашивали анти-Gr-1-PE антитела и PE-микрошарики для обогащения Gr-1 + лейкоциты использованием сепаратора autoMACS Pro. После autoMACS обогащения, Gr-1 процент в Gr-1 + и Гр-1 - собрал фракции оценивали с помощью проточной цитометрии. 1x10 6 Гр-1 + лейкоциты были удалены и окрашивали Mac-1-FITC антител для анализа и сравнения MDSC процент обогащенного объединения наивно лейкоцитов, не обогащенный, объединенный с опухолями лейкоцитов методом проточной цитометрии.

fig1.jpg "/>
Рисунок 1. AutoMACS обогащения Наивные Gr-1 + лейкоциты для MDSC FACS сортировки. Селезенки были собраны из поджелудочной железы опухоль и наивно мышей и обрабатываются в одной клеточной суспензии. Проточная цитометрия анализу наивный поверхности лейкоцитов окрашиваются Mac-1, Gr-1 люминесцентная конъюгированных антител, до autoMACS обогащения (A). Проточная цитометрия Анализ Gr-1 + (B) и Gr-1 - (C) фракции после autoMACS обогащения Gr-1 + клеток от объединения наивно leuckocytes окрашивали Gr-1-PE антитела и анти-PE микрошарики. Проточная цитометрия Анализ MDSC и Gr-1 + проценты после autoMACS обогащения Gr-1 + клеток от объединения наивно лейкоцитов (D) по сравнению с не-обогащенного объединенных лейкоцитов из опухоли мышей (E) (наивный мышей, п = 5 , опухоли мышей, п = 3). MDSC и Gr-1 проценты в закрытом представитель участков контура и гистограммы.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Это подробный метод для обработки и immunophentyping MDSC населения, которые применимы к различным лимфоидной ткани различных животных моделях. В частности, autoMACS обогащения может быть использован для выделения различных групп населения, включая лейкоцитарную Gr-1 истощения спленоцитов 4, очистка миелоидной подмножеств из селезенки и лимфатических узлов 5, изоляция нейтрофилов костного мозга 14 и очистки CD8 + Т-клетки селезенки и лимфатических узлов 15. Вне зави...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Нет конфликта интересов объявлены.

Благодарности

Мы признаем цитометрии USF ядро ​​потока фонда. Мы хотели бы поблагодарить д-ра Дениз Купер для совместного использования ресурсов. Мы также хотели бы поблагодарить майя Коэн, Лаура Пендлтон и Диана Латур за помощь в создании и съемках этого видео. Н.Н. поддержке NSF FG-LSAMP мост доктора стипендий HRD # 0929435. Эта работа финансировалась American Cancer Society институциональных исследований грант № 93-032-13/Moffitt онкологический центр награжден TG.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
РЕАГЕНТ КОМПАНИИ КАТАЛОГ # КОММЕНТАРИИ
1X фосфатного буфера Thermo Scientific Hyclone SH30028.02 Ca 2 + / Mg 2 + / Фенол Красный бесплатно
Альбумин из бычьей сыворотки (BSA) Sigma-Aldrich A7906 Давайте спокойно раствориться BSA в PBS, стерильная среда
Эмбриональной телячьей сыворотки (FBS) Thermo Scientific Hyclone SV3001403HI Тепло инактивированная; стерильной среде
Крыса анти-мышиных моноклональных антител CD16/32 (Fc Block) BD Biosciences 553142 Стерильная среда
Anti-мышь CD11b (Mac-1) FITC eBiosciences 11-0112 СтерильныйОкружающая среда
Anti-мышь Ly6G (Gr-1) APC eBiosciences 17-5931 Стерильная среда
Anti-мышь Ly6G (Gr-1) PE eBiosciences 12-5931 Стерильная среда
DAPI Invitrogen D1306 Последовательные разведения стерильной среде
Клеточная диссоциация сито Sigma-Aldrich CD1-1KT Перед применением автоклава
70-мкм фильтр BD Biosciences 352350 Стерильная среда
1X лизиса буфер eBiosciences 00-4333-57 Нагреться до комнатной температуры перед использованием; стерильной среде
Чашки Петри Fisher Scientific 08-757-12 Стерильная среда
50 мл конческих труб Thermo Scientific 339652 Стерильная среда
5 мл 12X75mm труб круглого полистирола дно BD Biosciences 352054 Известный как трубы FACS, стерильная среда
96-и V-днища Гранулирование 3897 Стерильная среда
Голубой Трипан CellGro 25-900-ДИ Стерильная среда
PE микрошарики Miltenyi Biotec 130-048-801 Стерильная среда
AutoMACS Pro сепаратор Miltenyi Biotec 130-092-545
AutoMACS Столбцы Miltenyi Biotec 130-021-101
AutoMACS Запуск буфер Miltenyi Biotec 130-091-221

Ссылки

  1. Goni, O., Alcaide, P., Fresno, M. Immunosuppression during acute Trypanosoma cruzi infection: involvement of Ly6G (Gr1(+))CD11b(+) immature myeloid suppressor cells. Int. Immunol. 14, 1125-1134 (2002).
  2. Zhu, B. CD11b+Ly-6C(hi) suppressive monocytes in experimental autoimmune encephalomyelitis. J. Immunol. 179, 5228-5237 (2007).
  3. Makarenkova, V. P., Bansal, V., Matta, B. M., Perez, L. A., Ochoa, J. B. CD11b+/Gr-1+ myeloid suppressor cells cause T cell dysfunction after traumatic stress. J. Immunol. 176, 2085-2094 (2006).
  4. Ghansah, T. Expansion of myeloid suppressor cells in SHIP-deficient mice represses allogeneic T cell responses. J. Immunol. 173, 7324-7330 (2004).
  5. Paraiso, K. H., Ghansah, T., Costello, A., Engelman, R. W., Kerr, W. G. Induced SHIP deficiency expands myeloid regulatory cells and abrogates graft-versus-host disease. J. Immunol. 178, 2893-2900 (2007).
  6. Yin, B. Myeloid-derived suppressor cells prevent type 1 diabetes in murine models. J. Immunol. 185, 5828-5834 (2010).
  7. Gabrilovich, D. I., Nagaraj, S. Myeloid-derived suppressor cells as regulators of the immune system. Nat. Rev. Immunol. 9, 162-174 (2009).
  8. Gallina, G. Tumors induce a subset of inflammatory monocytes with immunosuppressive activity on CD8+ T cells. J. Clin. Invest. 116, 2777-2790 (2006).
  9. Zhao, F. Increase in frequency of myeloid-derived suppressor cells in mice with spontaneous pancreatic carcinoma. Immunology. 128, 141-149 (2009).
  10. Greten, T. F., Manns, M. P., Korangy, F. Myeloid derived suppressor cells in human diseases. Int Immunopharmacol. 11, 802-806 (2011).
  11. Youn, J. I., Nagaraj, S., Collazo, M., Gabrilovich, D. I. Subsets of myeloid-derived suppressor cells in tumor-bearing mice. J. Immunol. 181, 5791-5802 (2008).
  12. Ribechini, E., Greifenberg, V., Sandwick, S., Lutz, M. B. Subsets, expansion and activation of myeloid-derived suppressor cells. Med. Microbiol. Immunol. 199, 273-281 (2010).
  13. Pilon-Thomas, S. Murine Pancreatic Adenocarcinoma Dampens SHIP-1 Expression and Alters MDSC Homeostasis and Function. PLoS One. 6, (2011).
  14. Panopoulos, A. D. STAT3 governs distinct pathways in emergency granulopoiesis and mature neutrophils. Blood. 108, 3682-3690 (2006).
  15. Preynat-Seauve, O. Extralymphatic tumors prepare draining lymph nodes to invasion via a T-cell cross-tolerance process. Cancer Res. 67, 5009-5016 (2007).
  16. Davies, D. Cell separations by flow cytometry. Methods Mol. Med. 58, 3-15 (2001).
  17. Maecker, H., Trotter, J. Selecting reagents for multicolor BD flow cytometry. Postepy Biochem. 55, 461-467 (2009).
  18. Bagwell, C. B., Adams, E. G. Fluorescence Spectral Overlap Compensation for Any Number of Flow Cytometry Parameters. Annals of the New York Academy of Sciences. 677, 167-184 (1993).
  19. Perfetto, S. P. Amine reactive dyes: an effective tool to discriminate live and dead cells in polychromatic flow cytometry. J. Immunol. Methods. 313, 199-208 (2006).
  20. Safarik, I., Safarikova, M. Use of magnetic techniques for the isolation of cells. J. Chromatogr. B. Biomed. Sci. Appl. 722, 33-53 (1999).
  21. Collazo, M. M. SHIP limits immunoregulatory capacity in the T-cell compartment. Blood. 113, 2934-2944 (2009).
  22. Mack, E., Neubauer, A., Brendel, C. Comparison of RNA yield from small cell populations sorted by flow cytometry applying different isolation procedures. Cytometry. A. 71, 404-409 (2007).
  23. Strauss, L., Czystowska, M., Szajnik, M., Mandapathil, M., Whiteside, T. L. Differential responses of human regulatory T cells (Treg) and effector T cells to rapamycin. PLoS One. 4, e5994(2009).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

AutoMACSGr 1Mac 1 Gr 1
Подготовка миелоидного Производные супрессоров (MDSC) от наивного и опухоли поджелудочной железы мышей использованием проточной цитометрии и автоматизированных магнитных активированный сортировки клеток (AutoMACS)
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.