Методическая статья

Мультимодальные изображений имплантации стволовых клеток в центральной нервной системе мышей

DOI:

10.3791/3906

⸱

13 июня 2012 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory of Experimental Hematology, University of Antwerp, 2Bio Imaging Lab, University of Antwerp

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этой статье описываются оптимизированные последовательности событий для мультимодальных изображений клеточных трансплантатов у грызунов мозга с помощью: (I) в естественных условиях биолюминесценции и магнитно-резонансной томографии, и (II) после смерти гистологический анализ. Сочетание этих условий изображение на одного животного позволяет сотовой трансплантата оценки с высоким разрешением, чувствительностью и специфичностью.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

За последнее десятилетие трансплантация стволовых клеток вызывает растущий интерес как в качестве основного, так и вспомогательного метода терапии различных заболеваний как в доклинических, так и в клинических исследованиях. Однако на сегодняшний день результаты, касающиеся функционального исхода и/или регенерации тканей после трансплантации стволовых клеток, весьма неоднозначны. Как правило, клинический эффект наблюдается без глубокого понимания лежащих в его основе механизмов1. В связи с этим были предприняты многочисленные усилия по разработке различных методов молекулярной визуализации для мониторинга приживления стволовых клеток с конечной целью точной оценки выживаемости, судьбы и физиологии трансплантированных стволовых клеток и/или их микроокружения. Изменения, наблюдаемые в одном или нескольких параметрах, определяемых с помощью молекулярной визуализации, могут быть связаны с наблюдаемым клиническим эффектом. В этом контексте наши исследования сосредоточены на комбинированном использовании биолюминесцентной визуализации (BLI), магнитно-резонансной томографии (MRI) и гистологического анализа для оценки приживления стволовых клеток.

Биолюминесцентная визуализация (BLI) часто используется для неинвазивного отслеживания клеток и мониторинга их выживаемости во времени после трансплантации2-7. Этот метод основан на биохимической реакции, при которой клетки, экспрессирующие репортерный ген люциферазы, способны излучать свет после взаимодействия с соответствующим субстратом (например, D-люциферином)8, 9. С другой стороны, магнитно-резонансная томография (МРТ) представляет собой неинвазивный метод, который применим в клинике10 и может быть использован для точного определения локализации клеточных трансплантатов с очень высоким разрешением11-15, хотя его чувствительность сильно зависит от контраста, создаваемого после мечения клеток контрастным агентом для МРТ. Наконец, посмертный гистологический анализ является предпочтительным методом для валидации результатов исследований, полученных с помощью неинвазивных методов, обеспечивая максимально возможное разрешение и чувствительность. Кроме того, конечный гистологический анализ позволяет проводить детальный фенотипический анализ трансплантированных клеток и/или окружающей ткани с использованием флуоресцентных репортерных белков и/или прямого мечения клеток специфическими антителами.

Резюмируя, в данной работе мы наглядно демонстрируем взаимодополняемость BLI, MRI и гистологии для выявления различных характеристик стволовых клеток и/или их микроокружения после трансплантации стволовых клеток в ЦНС мышей. В качестве примера стромальные клетки костного мозга, генетически модифицированные для экспрессии усиленного зеленого флуоресцентного белка (eGFP) и люциферазы светлячка (fLuc) и меченные синими флуоресцентными микроразмерными частицами оксида железа (MPIOs), будут трансплантированы в ЦНС иммунокомпетентных мышей, а результаты будут контролироваться с помощью BLI, MRI и гистологии (Рисунок 1).

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Сотовые подготовка

  1. Эксперимент следует начать использование бывших естественных культурных стволовых клеточных популяций генетически модифицированных выразить люциферазы и белков EGFP репортера. Здесь мы используем люциферазы / EGFP экспрессией мышиных костномозгового происхождения стромальных клеток (BMSC-Luc/eGFP), как описано выше по Bergwerf соавт. 2, 5.
  2. За два дня до мечения клеток, клетки пластины BMSC-Luc/eGFP при плотности 8 х 10 5 клеток на T75 культуры фляги в 15 мл полной среды расширения (CEM) с добавлением 1 мкг / мл Puromycine.
  3. Позвольте клеткам расти в течение 48 часов при температуре 37 ° С и 5% CO 2.
  4. Добавить 5 х 10 6 Ледниковый Синий микронных размеров частиц оксида железа (GB MPIO) на мл культуральной среды на растущий культуре клеток (всего: 75 х 10 6 частиц на 15 мл культуральной среды в колбе T75 культуры).
  5. Выдержите в течение 16 часов, чтобы частица поглощения через эндоцитоза.
  6. Смыть оставшиеся частицыи позволяет клеткам расти в течение еще 24 часов, чтобы получить клетки слияния и равномерное распределение Гб MPIO.
  7. Проверить визуально поглощения частиц с помощью флуоресцентной микроскопии путем подсчета соотношения EGFP + и ГБ MPIO + клеток в общей сумме EGFP + клеток.
  8. Wash Гб MPIO-меченых клеток BMSC-Luc/eGFP два раза по 10 мл PBS и урожай клеток после трипсин-EDTA лечение (5 мл на T75 культуры колбу в течение 5 минут).
  9. Вымойте собранных клеток и ресуспендируют в конечной концентрации 133 х 10 6 клеток / мл в PBS.
  10. Держите клеток на льду до трансплантации.

2. Сотовые имплантации в ЦНС мышей

  1. Анестезировать мышей внутрибрюшинного введения кетамина (80 мг / кг) + ксилазина (16 мг / кг) смеси.
  2. Подождите 5 минут, чтобы мыши, чтобы заснуть.
  3. Бритье головы мыши для обеспечения стерильных манипуляций.
  4. Наведите в стереотаксической раме.
  5. Desinfectкожа и влажные глаза мышей, чтобы предотвратить обезвоживание.
  6. Сделайте срединный разрез кожи головы, чтобы выставить череп, и просверлить отверстие в черепе помощью бормашины грата в заданные координаты: 2 мм задний и 2 мм боковой брегмы.
  7. Vortex клеточной суспензии кратко и аспирации суспензии клеток в шприце.
  8. Поместите шприц иглой на глубину 2,5 мм под твердой мозговой оболочкой и позволяют давления равновесие в течение 1 минуты.
  9. Вводите 3 мкл клеточной суспензии (4 х 10 5 клеток) на глубину 2 мм под твердой мозговой оболочкой и при скорости 0,70 мкл / мин с использованием автоматизированных микро-топливного насоса.
  10. Подождите еще 5 минут для предотвращения обратного потока вводили суспензию клеток.
  11. Медленно отведите иглы и дезинфицируют кожу границы до сшивания кожи.
  12. Вводите 300 мкл 0,9% NaCl раствора подкожно, чтобы предотвратить обезвоживание и поместите курсор под нагрева лампы, чтобы оправиться от наркоза. Администрирование рОст-оперативная анальгетик в соответствии с институциональными нормами.

3. В естественных условиях Биолюминесценция

  1. Анестезировать мышей смесью 3% изофлуран и кислорода.
  2. Поместите мышь в Фотон Imager и снизить уровень анестезии до 1,5%, ИФ и кислорода.
  3. Вводите 150 мг D-люциферин на кг массы тела внутривенно.
  4. Получить изображение в течение 5 минут с помощью программного обеспечения фотографии Vision.
  5. Выполните обработку изображений помощью M3vision программного обеспечения. Количественная наблюдаемого сигнала с использованием основных регионах, представляющих интерес.

4. В естественных условиях Магнитно-резонансная томография

  1. Анестезировать мышей с 3% изофлуран в смеси O 2: N 2 O (3:7).
  2. Поместите мышь в фиксатор горизонтальной системе 9.4T МР и снизить уровень анестезии до 1% изофлуран в смеси O 2: N 2 O (3:7).
  3. Влажные глаза мышей для предотвращения обезвоживанияТион, приложите ректального датчика для контроля температуры тела и контролировать частоту дыхания, поставив под датчик мыши живота.
  4. Поддержание дыхания при 110 ± 10 вдохов в минуту и ​​поддерживать температуру тела постоянной в пределах узкого диапазона 37 ± 0,5 ° С.
  5. Поместите катушку поверхность РФ на верхней части головы мыши и положение мыши в центре магнита.
  6. Приобрести набор из 10 корональных T2-спиновое эхо (SE) изображения для получения конкретной анатомической информации и Т2 *-взвешенных градиент эхо (GE) изображений с целью изучения миграции стволовых клеток с в плоскости разрешением 70 мкм 2. Установить последовательность параметры следующим образом: время повторения (TR): 500 мс, время эхо (TE): 8 мс (GE последовательности) и время повторения (TR): 4200 мс, время эхо (TE): 12.16 мс (SE последовательности); поле зрения (FOV): 18x18 мм 2, матрица: 256x256, 1 мм толщиной среза и 1 мм разделение часть (5,1 Paravision программного обеспечения).
  7. Выполните обработки данныхиспользование Amira 4.0.

5. Post Mortem гистологии

  1. Анестезировать мышей очень глубоко при вдыхании isofluorane (4%), кислорода (0,5 л / мин) и азота (1 л / мин) смесь в течение 2 минут. Жертвоприношение мышей шейки дислокации.
  2. Удалить мозга мышей от черепа и фиксировать ткани головного мозга в 4% параформальдегида в PBS в течение 2 часов.
  3. Высушить ткани мозга путем размещения головного мозга в дальнейшем в различных градиентах сахарозы: 2 часа в 5% сахарозы в PBS, 2 часа в 10% сахарозы в PBS в течение ночи на 20% сахарозы в PBS.
  4. Замораживание ткани мозга использованием жидкого азота и хранения ткани при температуре -80 ° C до секционирования.
  5. Раздел ткани головного мозга в 10 мкм разделам помощи криостата.
  6. Экран незапятнанный cryosections для голубой флуоресценции от ГБ частиц MPIO и зеленая флуоресценция от EGFP выражение клеток с помощью флуоресцентного микроскопа.
  7. Экран незапятнанный cryosections длязеленый / красный фоновой флуоресценции из воспалительных клеток.
  8. Выполните дальнейшие иммуногистохимического и иммунофлуоресцентного окрашивания для выявления эндогенных клеточных популяций (например, микроглии, астроцитов, Т-клетки, ...) во взаимодействии с клеточными трансплантатами.

6. Представитель Результаты

Мы здесь визуально представлена ​​оптимизированная последовательность событий для успешного мультимодальных изображений люциферазы / EGFP экспрессией (стволовые) клетки населения в центральной нервной системе мышей. Сначала описаны Гб MPIO маркировки процедура приводит к высокоэффективным маркировки BMSC-Luc/eGFP клетки, которые могут быть легко проверены с помощью флуоресцентной микроскопии (рис. 2A). Далее, после прививки Гб MPIO помечены BMSC-Luc/eGFP в ЦНС мышей, выживание сотовой трансплантат может контролироваться в естественных условиях BLI основаны на активности люциферазы (рис. 2В). Кроме того, точная локализация трансплантированных клеток могут быть проверены в естественных условиях (рис. 2). Наконец, гистологический анализ позволяет подтверждения результатов, полученных BLI и МРТ. Стабильный выживание было подтверждено стабильной выражение EGFP во времени (рис. 2D). Для этого колокализации EGFP-экспрессирующие клетки с голубыми флуоресцентными MPIO позволяет для точного определения локализации и выживанию трансплантированных клеток. Кроме того, этот двойной флуоресцентные маркировки стволовых клеток снижает возможность наблюдать ложные положительные результаты, основанные на фоновой флуоресценции созданные воспалительных клеток 5.

figure-protocol-1
Рисунок 1. Обзор обработки последовательности

  1. Сотовые маркировки: BMSC-Luc/eGFP помечены 5 х 10 6 Гб частиц MPIO в культуральной среде мл. После 16 часов инкубации и следующий период отдыха 24 часа в сутки, клетки собирают длявнутримозговой имплантации.
  2. Сотовые имплантации: GB MPIO помечены BMSC-Luc/eGFP привиты в мозг мыши на следующие координаты: брегмы 2 мм, 2 мм вправо от средней линии и 2 мм под твердой мозговой оболочкой.
  3. В естественных условиях BLI: после внутривенного введения 150 мг D-luciferin/kg массы тела, созданные свет был приобретен в течение 5 минут с помощью фотонов Imager.
  4. В естественных условиях МРТ: набор из 10 корональных T2-спиновое эхо (SE), изображения и Т2 *-взвешенных градиент эхо (GE) изображения в плоскости разрешением 70 мкм 2 были приобретены. Последовательность параметров были следующими: время повторения (TR): 500 мс, время эхо (TE): 8 мс (GE последовательности) и время повторения (TR): 4200 мс, время эхо (TE): 12.16 мс (SE последовательности); поле зрения (FOV): 18x18 мм 2, матрица: 256x256, 1 мм толщиной среза и 1 мм разделение срез.
  5. Посмертные гистология: 10 мкм толстый cryosection были обследованы на EGFP выражения и синий флуоресцентно меченных СККМ упеть флуоресцентного микроскопа.

figure-protocol-2
Рисунок 2. Мультимодальные визуализации трансплантатов стволовых клеток

  1. Прямая иммунофлюоресценция микроскопии Ледниковый синий (GB) MPIO помечены BMSC-Luc/eGFP.
  2. В естественных условиях BLI мышей вводили 4x10 5 Гб MPIO помечены BMSC-Luc/eGFP клеток в неделю 1 неделя 2 после имплантации. Статистический анализ обнаруженных сигналов BLI в неделю 1 неделя 2 после имплантации. Данные представлены как среднее число фотонов в секунду на стерадиан на квадратный сантиметр (тел / с / ср / см 2) с 5-минутный период времени + / - стандартная ошибка рассчитывается из фиксированной области интереса у мышей показывает четкий сигнал BLI в месте инъекции.
  3. Корональные двумерных МРТ Гб MPIO помечены BMSC-Luc/eGFP (левая панель: (I), Т2-взвешенные изображения спин эхо и (II), Т2 *-взвешенных градиент эхо изображения) и немеченого СККМ-LUC / EGFP (справа: (III), Т2-взвешенные изображения спин эхо и (VI), Т2 *-взвешенных градиент эхо изображение) трансплантатов в мозге мыши.
  4. Гистологический анализ Гб MPIO помечены BMSC-Luc/eGFP имплантатов в неделю 2 после имплантации. (Я) прямой иммунофлюоресценции анализа для локализации EGFP-выражения и ГБ MPIO помечены трансплантатов BMSC-Luc/eGFP. (II) Высокая детализация увеличением (г). (III) иммунофлуоресцентного окрашивания на GFAP антигена, что указывает на развитие астроцитарных рубцовой ткани в окружении Гб MPIO помечены BMSC-Luc/eGFP. (VI) иммунофлуоресцентного окрашивания для МБА-1 антиген, что свидетельствует о вторжении и окружающих ГБ MPIO помечены BMSC-Luc/eGFP по микроглии.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этом докладе мы описываем оптимизированный протокол для комбинации из трех дополнительных методов визуализации (BLI, МРТ и гистология) подробные характеристики клеточных имплантантов в ЦНС иммунокомпетентных мышей. Сочетание гена-репортера маркировки клеток, основанный на генетической модификации с корреспондентом гена люциферазы светляков и EGFP и прямой маркировки ячейки с ГБ MPIO, приводит к точной оценке трансплантатов стволовых клеток в живом организме.

Для частиц маркировки ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют никакого конфликта интересов.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы Работа выполнена при поддержке исследовательского гранта ID-конвертерного 2006 году в Университете Антверпена (предоставляется РРО и AVDL), на исследовательский грант G.0136.11 и G.0130.11 (предоставляется AVDL, ZB и ППО) и 1.5.021.09. N.00 (предоставляется РРО) Фонда научных исследований, Фландрии (FWO-Vlaanderen, Бельгия), по SBO грант ИВТ-60838: BRAINSTIM из Фламандского института по науке и технике (предоставляется ZB и AVDL), в частично Methusalem исследовательский грант от правительства Фландрии (предоставляется ZB), в частности, ИС-FP6-NoE Дими (LSHB-CT-2005-512146), EC-FP6-NoE EMIL (LSHC-CT-2004-503569) , а Интер университета Привлечение поляков IUAP-NIMI-P6/38 (предоставляется AVDL). Натали Де Vocht степень доктора наук, стипендия от FWO-Vlaanderen. Петр Ponsaerts это после защиты докторской диссертации в FWO-Vlaanderen.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Название реагента Компания Номер по каталогу Комментарии
IMDM Lonza Be12-722F Компонент среды CEM рост клеток
Эмбриональной телячьей сыворотки Гибко 10270-106 Компонент среды CEM рост клеток
Лошадиная сыворотка Гибко 1605-122 Компонент среды CEM рост клеток
Пенициллин, стрептомицин Гибко 15140 Компонент среды CEM рост клеток
Fungizone Гибко 15290-018 Компонент среды CEM рост клеток
PBS Гибко 14190
Puromycine Invivogen Муравей-пр-1
трипсин Гибко 25300
ГБ MPIO Удары лаборатории ME04F/7833
D-люциферин Promega E1601
Кетамин (Ketalar) Pfizer
Ксилазин (Rompun) Bayer здравоохранения
Изофлюран Isoflo 05260-05
0,9% раствором хлористого натрия Бакстер
параформальдегид Merck 1.04005.1000
сахароза AppliChem A1125
Micro-топливного насоса KD научных KDS100
Фотон тепловизор Biospace лаборатории
9.4T МР-сканер Bruker BioSpin Биоспек 94/20 USR
BX51 микроскоп Олимп BX51
Mycrom HM криостат Prosan HM525
шприц Гамильтон 7635-01
30 иглы Гамильтон 7762-03
Фотография видение программного обеспечения Biospace лаборатории
M3vision программного обеспечения Biospace лаборатории
Paravision 5,1 программного обеспечения Bruker BioSpin
Амира 4,0 программного обеспечения Visage изображений

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Rodriguez-Porcel, M., Wu, J. C., Gambhir, S. S. Molecular imaging of stem cells. , (2008).
  2. Bergwerf, I., De Vocht, N., Tambuyzer, B. Reporter gene-expressing bone marrow-derived stromal cells are immune-tolerated following implantation in the central nervous system of syngeneic immunocompetent mice. BMC Biotechnol. 9, 1(2009).
  3. Bergwerf, I., Tambuyzer, B., De Vocht, N. Recognition of cellular implants by the brain's innate immune system. Immunol. Cell Biol. 89, 511-516 (2011).
  4. Bradbury, M. S., Panagiotakos, G., Chan, B. K. Optical bioluminescence imaging of human ES cell progeny in the rodent CNS. J. Neurochem. 102, 2029-2039 (2007).
  5. De Vocht, N., Bergwerf, I., Vanhoutte, G. Labeling of Luciferase/eGFP-Expressing Bone Marrow-Derived Stromal Cells with Fluorescent Micron-Sized Iron Oxide Particles Improves Quantitative and Qualitative Multimodal Imaging of Cellular Grafts In Vivo. Mol Imaging Biol. , (2011).
  6. Reekmans, K., Praet, J., Daans, J. Current Challenges for the Advancement of Neural Stem Cell Biology and Transplantation Research. Stem Cell Rev. , (2011).
  7. Reekmans, K. P., Praet, J., De Vocht, N. Clinical potential of intravenous neural stem cell delivery for treatment of neuroinflammatory disease in mice. Cell Transplant. 20, 851-869 (2011).
  8. Contag, C. H., Bachmann, M. H. Advances in in vivo bioluminescence imaging of gene expression. Annu. Rev. Biomed. Eng. 4, 235-260 (2002).
  9. Sadikot, R. T., Blackwell, T. S. Bioluminescence imaging. Proc. Am. Thorac. Soc. 2, 511-540 (2005).
  10. Sykova, E., Jendelova, P., Herynek, V. MR tracking of stem cells in living recipients. Methods Mol. Biol. 549, 197-215 (2009).
  11. Daadi, M. M., Li, Z., Arac, A. Molecular and magnetic resonance imaging of human embryonic stem cell-derived neural stem cell grafts in ischemic rat. 17, 1282-1291 (2009).
  12. Heyn, C., Ronald, J. A., Ramadan, S. S. In vivo MRI of cancer cell fate at the single-cell level in a mouse model of breast cancer metastasis to the brain. Magn. Reson. Med. 56, 1001-1010 (2006).
  13. Hoehn, M., Kustermann, E., Blunk, J. Monitoring of implanted stem cell migration in vivo: a highly resolved in vivo magnetic resonance imaging investigation of experimental stroke in rat. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 16267-16272 (2002).
  14. Jendelova, P., Herynek, V., DeCroos, J. Imaging the fate of implanted bone marrow stromal cells labeled with superparamagnetic nanoparticles. Magn. Reson. Med. 50, 767-776 (2003).
  15. Modo, M., Mellodew, K., Cash, D. Mapping transplanted stem cell migration after a stroke: a serial, in vivo magnetic resonance imaging study. Neuroimage. 21, 311-317 (2004).
  16. Boutry, S., Brunin, S., Mahieu, I. Magnetic labeling of non-phagocytic adherent cells with iron oxide nanoparticles: a comprehensive study. Contrast Media Mol. Imaging. 3, 223-232 (2008).
  17. Mailander, V., Lorenz, M. R., Holzapfel, V. Carboxylated superparamagnetic iron oxide particles label cells intracellularly without transfection agents. Mol Imaging Biol. 10, 138-146 (2008).
  18. Modo, M., Hoehn, M., Bulte, J. W. Cellular MR imaging. Mol. Imaging. 4, 143-164 (2005).
  19. Hinds, K. A., Hill, J. M., Shapiro, E. M. Highly efficient endosomal labeling of progenitor and stem cells with large magnetic particles allows magnetic resonance imaging of single cells. Blood. 102, 867-872 (2003).
  20. Shapiro, E. M., Sharer, K., Skrtic, S. In vivo detection of single cells by MRI. Magn. Reson. Med. 55, 242-249 (2006).
  21. Shapiro, E. M., Skrtic, S., Sharer, K. MRI detection of single particles for cellular imaging. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 10901-10906 (2004).
  22. Crabbe, A., Vandeputte, C., Dresselaers, T. Effects of MRI contrast agents on the stem cell phenotype. Cell Transplant. 19, 919-936 (2010).
  23. Szarecka, A., Xu, Y., Tang, P. Dynamics of firefly luciferase inhibition by general anesthetics: Gaussian and anisotropic network analyses. Biophys. J. 93, 1895-1905 (2007).
  24. Keyaerts, M., Heneweer, C., Gainkam, L. O. Plasma protein binding of luciferase substrates influences sensitivity and accuracy of bioluminescence imaging. Mol. Imaging. Biol. 13, 59-66 (2011).
  25. Keyaerts, M., Verschueren, J., Bos, T. J. Dynamic bioluminescence imaging for quantitative tumour burden assessment using IV or IP administration of D: -luciferin: effect on intensity, time kinetics and repeatability of photon emission. Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging. 35, 999-1007 (2008).
  26. Zhang, Y., Bressler, J. P., Neal, J. ABCG2/BCRP expression modulates D-Luciferin based bioluminescence imaging. Cancer Res. 67, 9389-9397 (2007).
  27. Brightwell, G., Poirier, V., Cole, E. Serum-dependent and cell cycle-dependent expression from a cytomegalovirus-based mammalian expression vector. Gene. 194, 115-123 (1997).
  28. Grassi, G., Maccaroni, P., Meyer, R. Inhibitors of DNA methylation and histone deacetylation activate cytomegalovirus promoter-controlled reporter gene expression in human glioblastoma cell line U87. Carcinogenesis. 24, 1625-1635 (2003).
  29. Krishnan, M., Park, J. M., Cao, F. Effects of epigenetic modulation on reporter gene expression: implications for stem cell imaging. FASEB J. 20, 106-108 (2006).
  30. Svensson, R. U., Barnes, J. M., Rokhlin, O. W. Chemotherapeutic agents up-regulate the cytomegalovirus promoter: implications for bioluminescence imaging of tumor response to therapy. Cancer Res. 67, 10445-10454 (2007).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

EGFP

Похожие статьи