Методическая статья

Выделение CD4 + Т-клеток от мышей лимфатических узлов с помощью Miltenyi MACS очистки

DOI:

10.3791/409

⸱

1 ноября 2007 г.

 , 
1Department of Physiology and Biophysics, University of California, Irvine (UCI)

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Выделение лимфоцитов с использованием набора Miltenyi ПДК является надежным способом очищают клетки от целых лимфоидной гомогенатах ткани. Клетки очищали с использованием системы Miltenyi, как правило, ≥ 96% чистой. Здесь мы демонстрируем, шаги, предпринятые для изоляции CD4 + Т-клеток, одна из многих комплектов, предлагаемых Miltenyi.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Изоляция клеток от первичного источника является необходимым шагом во многих более сложных протоколов. Miltenyi предлагает комплекты для изоляции ячеек нескольких организмов, включая человека, не человеческих приматов, крысы и, как мы описываем здесь, мыши. Магнитный шарик-ячейкой на основе разделения позволяет либо положительного отбора (или элементов истощения), а также негативный отбор. Здесь мы показываем негативный отбор нетронутой или наивны CD4 + Т-клетки. Используя этот стандартный протокол мы обычно очищают клетки, которые ≥ 96% чистой CD4 + / CD3 +. Этот протокол используется в сочетании с Dissection протокол и 2-Фотон изображений периферических лимфатических узлов у мышей опубликована в выпуске 7 Юпитера, для очистки Т-клеток и другие типы клеток, чтобы восприимчиво передачу для работы с изображениями целей. Хотя мы не продемонстрировали FACS анализ в этом видео протокол, настоятельно рекомендуется проверить общую чистоту изолированных клеток с использованием соответствующих антител с помощью FACS. Кроме того, мы демонстрируем нестерильный способ выделения Т-клеток. Если стерильные клетки необходимы для конкретного конечного пользователя приложения, убедитесь, что сделали все продемонстрировали процедур в капюшоне культуры ткани при стандартных стерильных условиях. Спасибо за внимание и удачи в ваших собственных экспериментов!

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Пожалуйста, прочитайте и следуйте протокол, входящий в комплект Miltenyi или на сайте http://www.miltenyibiotec.com/ .

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Изоляция клеток от первичного источника является необходимым шагом во многих более сложных протоколов. Miltenyi предлагает комплекты для изоляции ячеек нескольких организмов, включая человека, не человеческих приматов, крысы и, как мы описываем здесь, мыши. Магнитный шарик-ячейкой на основе разделения позволяет либо положительного отбора (или элементов истощения), а также негативный отбор. Здесь мы показываем негативный отбор нетронутой или наивны CD4 + Т-клетки. Используя этот стандартный протокол мы обычно очищают клетки, которые ≥ 96% чи...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют конфликтов интересов, подлежащих раскрытию.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы хотели бы поблагодарить Ребекка Paquett для подготовки буфера MACS.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Буфер для MACSРеагентПожалуйста, предоставьте исходный текст для перевода.Пожалуйста, предоставьте исходный текст для перевода.Подготовьте согласно инструкции компании Miltenyi.
Набор для выделения CD4+ Т-клеток: метод нетронутого выделения РеагентMiltenyi Biotec130-090-860Для использования с системой Miltenyi.
Стерильный фосфатно-солевой буферный раствор (PBS)РеагентДля использования при приготовлении буфера MACS.
Культуральная чашка Corning диаметром 35 мм без обработки TCПрочееCorning430588Используется для приготовления суспензии единичных клеток.
клеточный фильтр с размером пор 70 мкм Инструмент BD Biosciences352350Используется при подготовке суспензии из отдельных клеток.
Шприц объемом 6 мл ИнструментTyco Healthcare, Covidien8881516051Используется при приготовлении суспензии отдельных клеток.
10-кратный раствор Дульбекко’фосфатно-солевой буферный раствор без кальция и магния (DPBS)РеагентInvitrogen14200-075Для использования при лизисе эритроцитов.
Стерильная вода Реагент Sigma-AldrichW4502Для использования при лизисе эритроцитов.

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 998-1003 (2004).
  2. Matheu, M. P., Deane, J. A., Parker, I., Fruman, D. A., Cahalan, M. D. Class IA phosphoinositide 3-kinase modulates basal lymphocyte motility in the lymph node. J Immunol. 179, 2261-2269 (2007).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

LS

Похожие статьи