Выделение лимфоцитов из половых путей мышь Mucosa

Краткое содержание

Эффективный способ изолировать тракта лимфоциты мыши половых описано. Этот метод использует фермент переваривания и Percoll разделения градиента, чтобы обеспечить эффективное изоляции. Эта методика также адаптируется к для использования в других видах

Аннотация

Слизистых поверхностей, в том числе желудочно-кишечного тракта, мочеполовых и дыхательных путей, обеспечивают порталы для проникновения патогенов, таких как вирусы и бактерии ^1. Слизистые оболочки также индуктивных сайтов в принимающей для создания иммунитета против патогенов, таких как патчи Peyers в желудочно-кишечном тракте и носовой связанных лимфоретикулярных ткани в дыхательных путях. Эта уникальная функция дает иммунитет слизистой оболочки в качестве важнейшего игрока в системе защиты организма. Многие исследования были направлены на желудочно-кишечного и респираторного слизистой сайтов. Тем не менее, наблюдается небольшое исследование репродуктивного слизистой сайтов. Слизистой оболочки половых путей является основной сайт инфекции, передаваемые половым путем (ЗППП), в том числе бактериальных и вирусных инфекций. ЗППП являются одной из наиболее важных проблем в области здравоохранения, стоящих перед миром сегодня. Центры по контролю и профилактике заболеваний считает, что существует 19 миллионов новых инфекционных каждый год в Соединенных Штатах. STDs стоить здравоохранения США системы 17 миллиардов долларов каждый год ^2, и стоимость лиц еще в непосредственном и пожизненные последствия для здоровья. Для того, чтобы противостоять этой задачей, более глубокое понимание репродуктивной иммунитет слизистой оболочки необходимы и выделения лимфоцитов является важным компонентом этих исследований. Здесь мы представляем метод воспроизводимо изолировать лимфоцитов из мышиных женских половых путей для иммунологических исследований, которые могут быть модифицированы для адаптации к другим видам. Описанный ниже метод основан на одной мыши.

Протокол

1. Удаление половых путей

1. Усыпить мыши с использованием утвержденных принципов. Сделать низкой средней линии разреза и убрать кожу.
2. Изолировать и удалять целые половых путей, из яйцевода в вагинальное отверстие.
3. Открыть весь тракт продольно с ножницами.
4. Вырезать половых путей с мелкими хирургическими ножницами на мелкие кусочки (примерно <1 мм) в чашку Петри с полной RPMI-10/EDTA (см. формулу ниже) и перемешать ткани в 125 мл колбу при комнатной температуре на магнитной мешалки установлен для 15 мин. Эта процедура повторяется дважды, а затем супернатант, который содержит эпителия и другого мусора, отбрасывается.
5. Выле....

Обсуждение

В этом протоколе, показано, как подготовить лимфоциты мыши половых путей и легко освоили. Наиболее критическая точка этого процесса является поддержание жизнеспособности клеток, сохраняя клетки на льду. Выход клеток из этого метода зависит от техники, обработки мастерство, инфекционные состояния мыши (или наивные день после заражения), возбудителя (бактериальные, вирусные, грибковые) и части мышиного репродуктивного тракта обследованных (яйцевод, матку, вагинальные сегмента или всей половых путей). Наша группа и другие .......

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Имя	Компания	Номер в каталоге
Коллагеноз	Sigma Life Sciences	C2139-1G
Percoll	GE Healthcare Bio-Sciences	17-0891-01
RPMI1640	Gibco от Life Technologies	11875